菜薹荧光微卫星锚定片段长度多态性(MFLP)技术体系的建立

来源 :中国园艺学会2011年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:szzc2001
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  本实验选用16个菜薹(菜心)品种作材料,采用CTAB法提取基因组DNA,荧光引物M13-F-IRDye700购自美国LICOR公司,其序列为5’-CACGACGTTGTAAAACGAC-3’;SSR锚定引物、加尾SSR锚定引物、MseI接头、预扩增和选择性扩增引物均由上海生物工程有限公司合成,用于PCR反应的Taq DNA聚合酶、MseI限制性内切酶、T4 DNA连接酶等试剂购自上海生工生物工程有限公司。根据MFLP的基本原理,调节酶切反应、预扩增和选择性扩增的条件,运用琼脂糖凝胶电泳检测预扩增效果,利用LICOR 4300 DNA遗传分析仪进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测选择性扩增产物。经过实验操作16个菜薹材料预扩增产物在300~900 bp区域呈明显的弥散带,表明预扩增效果好;16个菜薹品种的选择性扩增结果显示MFLP荧光图谱清晰,多态性条带丰富可辨,表明该技术体系适用于菜薹材料的基因分型。
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