【摘 要】
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将本实验室保存的一株La Sota 病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代五次后筛选到一株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为La Sota C5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异；参照La Sota C5 株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR 的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT 转录载体中,成功构建含有病
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所禽病实验室,上海200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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将本实验室保存的一株La Sota 病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代五次后筛选到一株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为La Sota C5,并对其进行全基因组测序,克隆株与亲本株在生物学特性与基因序列上都存在一定的差异；参照La Sota C5 株全基因序列单酶切位点,用RT-PCR 的方法将基因组分8段扩增,按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT 转录载体中,成功构建含有病毒全长cDNA 的转录载体TVT-La Sota C5；将TVT-La Sota C5与辅助质粒pCI-NP、pCI-P 和pCI-L 共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的La Sota 株新城疫病毒。
其他文献
2013年3月底,安徽和上海两地出现H7N9亚型流感病毒感染人事件.分析H7N9亚型流感病毒序列,发现其HA,NA与内部基因来源各不相同,推测该毒株为一株三源重组病毒.H7N9 亚型流感病毒对禽类是低致病性的,但是却引起了人的高致死率,而这其中的机理仍是未知的.
不同亚型间的禽流感病毒的多基因重组增加了我国南方家鸭中循环存在着的流感病毒的遗传多样性,有研究表明,H3 亚型禽流感病毒是家鸭中普遍存在着的流感亚型,而家鸭作为天然基因库与家禽之间的重要桥梁,其存在促进了流感病毒的传播与新型流感病毒的产生。
2013年3月，在上海和安徽两地率先出现了人感染H7N9 禽流感的病例，继而在全国多个地区发生了疫情。迄今为止该病毒已导致135人的感染和30多人的死亡。这种H7N9病毒可能是由不同亚型的流感病毒在不同宿主中重配而来，但对于H7N9病毒具体的起源与进化路径还知之甚少，这严重影响了有效病毒防控政策的制订。尽管H7N9病毒已得到相对控制，但冬季该病毒可能会卷土重来。
在哺乳动物上,TLR7是一种膜结合受体,可以识别抗病毒蛋白和单链的RNA,进而参与抗病毒(如：流感病毒)天然免疫反应.但是,目前还不清楚该受体是否存在于鹅上,是否像哺乳动物上的TLR7一样可以识别流感病毒.本研究利用哺乳动物和鸡中已报道的TLR7基因序列进行同源比对,寻找功能区的保守序列设计简并引物,通过同源克隆和RACE-PCR获得TLR7基因的cDNA全长序列.经研究,鹅TLR7编码区全长序列
从2002年起,H5N1禽流感病毒开始对水禽产生致病性,这是极不寻常的,是对正常的生态环境的破坏.2005年,在中国西部的青海省青海湖爆发的H5N1禽流感可以对多种水禽致死.流感病毒的致病性是由多种因素决定,主要取决于病毒复制和宿主免疫反应的后果.
MDVs of different serotypes were considered as one of the most potential vectors for polyvalent vaccines.
用RT-PCR方法扩增了7 株分离自江苏地区的H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因片段,进行测序分析.结果表明：7株病毒NA 基因同源性为86.0％～99.6％,其中5株分离自鸡的毒株属于h9.4.2分支,2株分离自鸭的毒株属于h9.4.1分支.氨基酸序列分析发现,5株鸡源分离株NA基因在61～63位缺失了3个氨基酸,2株鸭源分离株NA 基因在39～40位缺失了2个氨基酸.
对云南省两个发病鸡场的组织病料进行病原分离，通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR 检测，证明分离毒株为新城疫病毒.采用特异性引物经RT-PCR 扩增F基因，纯化后克隆至pMD18-T 载体，并对其进行测序.序列比对及系统发育分析结果表明：分离获得的云南省2株新城疫毒株F基因核苷酸与Lasota 株之间的同源性为99.4％-99.6％，与F48E9 株之间的同源性为89.0％-89.1％.
为正确认识鸽源新城疫病毒(NDV)的分子特征和致病性,以便于采取措施进行有效防控.本研究对从发病鸽群中分离鉴定的一株NDV(Pigeon/China/SDS/2011)进行了全基因组测序分析和致病性试验.全基因测序结果显示Pigeon/China/SDS/2011基因组长度为15192nt,具有NDV 强毒株F蛋白裂解位点112RRQKRF117.遗传进化分析发现Pigeon/China/SDS/
新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的的高度接触性、急性败血性禽类传染病。本研究根据GenBank 公布的LaSota 和GM 株基因序列设计特异性引物扩增V 和W 基因通过融合PCR 获得NDV疫苗株LaSota 和强毒株GM V和W基因,构建