论文部分内容阅读
目的：为了便于人干扰素γ功能研究，制备6His修饰的人干扰素γ。
方法：采用一步反向PCR扩增编码人干扰素γ的cDNA序列,克隆到质粒pUC19,测序鉴定正确后构建到pQE80L表达质粒中，经BamHI和HindⅢ双酶切后，行1.2％琼脂糖凝胶电泳鉴定；利用SDS-PAGE和Western blot 检测表达的目的蛋白，Ni2+-NTA柱纯化蛋白，酶联免疫吸附测定纯化的目的蛋白。
结果:一步反向PCR扩增得到编码人干扰素γcDNA片段，测序结果正确,SDS-PAGE和Western blot分析显示His修饰的人干扰素γ在大肠杆菌中获得了高效表达，SDS-PAGE证实目的蛋白具有较高纯度，酶联免疫吸附测定显示目的蛋白具有高的生物活性。
结论：成功制备了6His肽修饰的人干扰素γ。