【摘 要】
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目的：本课题组前期研究发现麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein,MBP)具有诱导Th1免疫应答、活化小鼠腹腔巨噬细胞并向M1型极化作用.肿瘤相关巨噬细胞TAM(Tumor-associated macrophage,TAM)是浸润于肿瘤间质的巨噬细胞,具有促进肿瘤细胞生长、血管形成、细胞外基质重塑的作用,主要为M2型巨噬细胞.本研究拟探讨MBP对肿瘤上清诱导的M2型巨噬细
【机 构】
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吉林大学基础医学院免疫系,长春130021;吉林大学中日联谊医院乳腺外科,长春130033 吉林大
【出 处】
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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议
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目的：本课题组前期研究发现麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein,MBP)具有诱导Th1免疫应答、活化小鼠腹腔巨噬细胞并向M1型极化作用.肿瘤相关巨噬细胞TAM(Tumor-associated macrophage,TAM)是浸润于肿瘤间质的巨噬细胞,具有促进肿瘤细胞生长、血管形成、细胞外基质重塑的作用,主要为M2型巨噬细胞.本研究拟探讨MBP对肿瘤上清诱导的M2型巨噬细胞能否具有翻转作用及其可能机制,为新型抗肿瘤免疫增强剂的开发奠定基础.方法：以小鼠乳腺癌细胞系4T1及EMT6肿瘤细胞培养上清(Tumor cell supemantants,TCS)模拟肿瘤微环境诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞形成TAM,分别以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的M1型和白介素-4(Interleukin-4,IL-4)诱导的M2型巨噬细胞为对照,分别加入5μg/ml LPS、20ng/ml IL.-4、5μg/ml MBP、20％TCS与20％TCS+5μg/ml MBP作用48h,通过免疫荧光免疫荧光检测iNOS(M1型标志)与CD206(M2型标志)的表达,流式细胞术检测CD 16/32(M1型标志)与CD206的表达,Greiss法检测各组细胞NO的分泌水平,ELISA法检测各组细胞分泌IL-12(M1型分泌的细胞因子)和IL-10(M2型分泌的细胞因子)的水平,鉴定TCS诱导TAM的同时综合分析MBP对TCS诱导的TAM的翻转作用.通过流式细胞术分析MBP作用下对TCS诱导的TAM的Toll样受体2/4(Toll-like receptor 2/4,TLR2/TLR4)的表达水平,并分析在TLR4拮抗剂多粘菌素B作用的条件下TAM的活化水平.结果：TCS诱导RAW264.7细胞主要极化为M2型巨噬细胞,表现为CD206表达上调,IL-10分泌增高；MBP可使TCS诱导的M2型巨噬细胞翻转为M1型,表现为CD16/32、iNOS表达水平增高,CD206表达下降,NO的分泌水平增高,IL-12的分泌水平增高、IL-10分泌水平降低.与TCS诱导的RAW264.7细胞相比,TCS+MBP组TLR2的表达显著增高,而TLR4的表达水平无明显变化；当给与多粘菌素B时,对TCS诱导极化的TAM活化水平无显著影响.结论：MBP可使TCS诱导的M2型巨噬细胞翻转为M1型,并且MBP可能是通过TLR2发挥作用.这表明MBP未来可能作为免疫调节剂通过翻转TAM分化类型发挥抗肿瘤作用.
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