禽流感病毒H5N1实验室检测诊断系统的建立和应用

来源 :第一届国际临床病毒学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:iris_1204
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  针对人高致病性禽流感病毒H5N1建立了包括核酸和血清学实验室检测诊断系统,并进行系列应用.(1) PCR:以PCR方法为基础先后建立一步法RT-PCR (包括甲型、H1、H3、N1、H5和N2鉴别检测体系)和Real-time RT-PCR(包括甲型和H5鉴别检测体系)高效检测体系,针对H5N1病毒检测,灵敏度分析显示,RT-PCR的灵敏度为1 TCID50,Real-time RT-PCR为10-1 TCID50;(2)分子鉴别诊断(Molecular differentia diagnosis,MDD):将Luminex xMAP技术和Tem-PCR技术有机结合,建立了一种包括流感病毒、副流感病毒、腺病毒、偏肺病毒、鼻病毒等10多种常见呼吸道感染病毒多重核酸分子鉴别检测体系,通过对上述病毒的交叉检测分析其特异性,结果显示各病毒之间未出现交叉反应;灵敏度分析显示,甲型流感为102 PFU,乙型流感为104 PFU,针对H5N1病毒检测,其灵敏度为l TCID50.(3)核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplification,NASBA)技术:为一种以RNA为模板进行等温持续扩增,产物为RNA的实时检测技术,针对H5N1病毒建HA和NA亚型鉴定NASBA体系,并进行了特异性、灵敏度和可靠性分析.特异性分析通过对不同年代采集得到的H1N1、H3N2、FluB、H9N2以及高致病性人禽流感H5N1病毒株进行检测,结果显示只有H5N1 HA和NA检测为阳性;灵敏度分析显示和Real-time RT-PCR相同,但结果判断较后者更为明确;可靠性分析采用对从高致病性禽流感患者采集的17例临床标本进行检测,结果显示,病毒分离为阳性的标本,NASBA检测均为阳性.(4)单放射扩散溶血(Single Radial Haemolysis,SRH)技术:以灭活H5N1病毒为抗原,经抗原抗体反应和补体结合作用后,进行抗体检测的技术.经过对血细胞类型、抗原浓度和琼脂浓度优化分析显示,在H5N1病毒抗体检测时,使用鸡红细胞、抗原浓度为1000HAU和琼脂糖浓度为1%是最为有效的SRH检测体系;与H1N1和H3N2等季节性流感病毒进行交叉检测分析显示,H5N1SRH检测和季节性流感病毒之间未出现交叉反应.通过上述核酸和血清学多重检测体系,组建了禽流感病毒H5N1实验室检测诊断系统,国家流感中心使用该系统对中国发生的所有禽流感病例进行了应用性检测,应用结果显示,该系统是一个快速有效的检测系统,能够早期准确的从实验室角度发现和确诊禽流感病例.
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