目的在巴斯德毕赤酵母中表达人干燥综合征A抗原60(SSA60)并建立胶体金快速检测方法。方法表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定。结果表达产物SSA60的分子量约60 000,高拷贝毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600-950mg/L。DIGFA检测85份SS患者血清和30份正常人血清,抗SSA检测阳性率为95.3%(81/85),特异性为100%(30/30)。与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96.5%(111/115),差异无显著性(p>0.05)。结论本研究用巴斯德毕赤酵母真核表达系统高效表达重组自身抗原SSA60,明显优于原核表达系统,酵母分泌型SSA60表达量高,无需包涵体的变复性处理,也不需融合蛋白的凝血酶切割,纯化时能省去很多麻烦且节约时间和成本,不失为表达重组蛋白的理想方法。DIGFA简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的诊断。