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目的:克隆肉毒梭菌(Clostridium botulihum)A型肉毒毒素(BoNTa)编码基因。
方法:提取肉毒梭菌国际标准株(62A)基因组DNA,根据肉毒梭菌BONTa基因(GenBank登录号M30196)序列设计引物,采用LA-PCR方法,扩增出目的基因片段,与pMD18-T载体连接,通过酶切鉴定、测序分析克隆到的A型肉毒毒素基因序列。
结果:该基因片段与Genbank中的BoNTa基因序列(GenBank登录号M30196)一致性为100[%],预测氨基酸序列一致性为100[%]。
结论:成功克隆肉毒梭菌的A型肉毒毒素基因序列,为肉毒梭菌的快速检测,以及进一步用基因工程方法生产A型肉毒毒素奠定了基础。