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诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cell,iPSCs)是目前细胞生物学和分子生物学领域的研究热点。本研究中,通过采用慢病毒感染的方法将含有Oct4,Sox2,Nanog和Lin28全能性基因的慢病毒颗粒转导人皮肤成纤维细胞,获得了iPSCs。人的iPSCs在很多方面与人胚胎干细胞有相似性,比如细胞的克隆形态、生长特性、表面标志物、类胚体形成及体外定向诱导分化等方面。我们在实验中发现:
①iPSCs的产生效率很低,大约在万分之几到千分之几之间;主要原因很可能与病毒转染这种基因导入手段的缺陷有关。②前3代细胞克隆传代时,细胞发生分化和凋亡的现象很多,很难扩增培养。针对这种现象我们在克隆传代时,培养基中添加了Y-27632,它是一种酪氨酸激酶抑制剂-ROCK(p160-Rho-associated coiled—coil kinase),对胚胎干细胞的凋亡起决定作用。阻断ROCK的活化能够明显抑制胚胎干细胞的凋亡,未处理细胞同处理细胞克隆形成率分别为1%和27%。③iPS细胞的体外定向分化的诱导体系和人类胚胎干细胞的分化极其相似,我们运用OP9细胞产生的条件培养液成功地建立了iPS细胞体外定向分化形成造血祖细胞的分化体系。