【摘 要】
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目的：细菌感染在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病和急性加重中起重要作用.脂多糖(LPS)诱导的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的经典通路是通过Toll样受体(TLR)和NF-κB介导信号,但其
【出 处】
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第六届全国慢性阻塞性肺疾病学术会议
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目的：细菌感染在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病和急性加重中起重要作用.脂多糖(LPS)诱导的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的经典通路是通过Toll样受体(TLR)和NF-κB介导信号,但其具体的信号机制尚未明确.本研究旨在明确AMPK在LPS诱导的炎症因子TNF-α的分泌过程中的作用.
研究对象及方法：C57/BL6野生型和AMPKα2-/-健康雄性小鼠均随机分为正常对照组和LPS组,每组各6只.LPS组采用腹腔注射LPS(3mg/kg),对照组同时给予相等体积生理盐水,1.5小时后收集血清.酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TNF-α水平.分离培养野生型和AMPKα2-/-雄性小鼠血液单核细胞,给予LPS(0.1μg/mL)刺激,蛋白免疫印迹法检测AMPK磷酸化水平,ELISA检测细胞上清液TNF-α分泌.培养人单核细胞性白血病细胞(THP1),在有无Compound C(10-5M)存在下给予AICAR(10-4M)刺激,蛋白免疫印迹法检测AMPK磷酸化水平,ELISA检测细胞上清液中TNF-α水平.
结果：LPS组小鼠与对照组相比血清TNF-α水平显著增加(P＜0.001).给予LPS处理的AMPKα2-/-小鼠(154.6±30.18)pg/mL血清TNF-α显著低于LPS处理的野生型小鼠(340.2±78.74)pg/mL(P＜0.01).小鼠单核细胞AMPKα2缺失抑制LPS诱导的AMPK磷酸化,AMPKα2-/-小鼠单核细胞(34.74±3.568)pg/mL与野生型小鼠单核细胞(49.66±1.710)pg/mL相比细胞上清液中TNF-α显著降低(P＜0.05).在THP1细胞上,Compound C能够显著抑制AICAR诱导的AMPK的磷酸化,抑制AICAR诱导的TNF-α分泌(P＜0.05).
结论：AMPK是参与LPS诱导的TNF-α分泌过程的重要信号分子,AMPK通过其磷酸化状态调节LPS诱导的TNF-α分泌,AMPKα2缺陷降低小鼠及单核细胞LPS诱导的TNF-α分泌.
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