【摘 要】
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为了研究家蚕（Bombyx mori）丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Serpin-6)在大肠杆菌中的表达情况，本研究将获得的家蚕Serpin-6基因去信号肽后，设计两对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的特异引物，对cDNA编码区全长及信号肽缺失的片段进行PCR扩增，并与经过同样双酶切的pET-28a(+)构建原核表达载体。重组质粒经限制性内切酶双酶切及DNA测序鉴定后，转化大肠杆菌BL21（DE3），经
【机 构】
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苏州大学基础医学与生物科学学院, 江苏苏州 215123 苏州大学基础医学与生物科学学院, 江苏苏
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为了研究家蚕（Bombyx mori）丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Serpin-6)在大肠杆菌中的表达情况，本研究将获得的家蚕Serpin-6基因去信号肽后，设计两对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的特异引物，对cDNA编码区全长及信号肽缺失的片段进行PCR扩增，并与经过同样双酶切的pET-28a(+)构建原核表达载体。重组质粒经限制性内切酶双酶切及DNA测序鉴定后，转化大肠杆菌BL21（DE3），经1 mmol/L IPTG 诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE显示出含有完整的ORF的Serpin-6在大肠杆菌BL21（DE3）中不能成功表达，而Serpin-6基因信号肽缺失的片段在大肠杆菌BL21（DE3）中以包涵体形式高效表达。Western-blotting分析表明，被诱导的去信号肽Serpin-6在分子量约为45kDa处检测到一条特异性条带，与预测的融合蛋白分子量大小相符，而对照组BL21菌、空pET-28a(+)转化BL21和非诱导转化去信号肽目的基因的BL21菌都没有检测到目的条带，进一步证明了去信号肽Serpin-6得到成功表达。但在同样的实验条件下，没有去掉信号肽的Serpin-6基因并没有检测到特异性条带。推测家蚕Serpin-6基因在大肠杆菌中的表达，受其N末端信号肽的影响。
其他文献
信号失活是嗅觉动态过程的一个重要步骤，这一过程包括多样的气味降解酶类。本文利用RT-PCR方法从家蚕蛾的触角中克隆了一个细胞色素P450基因CYP6AE21。该基因含有一个1572bp的ORF，编码一个推定的523个氨基酸的蛋白质。CYP6AE21推定的分子量为60.5kD，等电点为8.4，含有细胞色素P450的特征序列血红素结合位点区域。CYP6AE21和家蚕CYP6AE2基因一样在相同位置含有
果蝇l(3)neo18基因可以通过P转座子诱发致死突变，编码的蛋白质具有NADH脱氢酶（ND）的功能。利用生物信息学、RACE和RT-PCR等方法克隆了家蚕l(3)neo18同源基因，分析了基因结构与表达谱。Bm-l(3)neo18基因(EU826676)的cDNA全长为868bp，由573bp的完整开放读码框(ORF)序列、25bp的5′端非翻译区序列(5′UTR)和251bp的3′端非编码区序
VASA样蛋白是决定生殖系发育的重要调控蛋白因子之一，具有广泛的保守性，vasa的表达被认为是生殖细胞中最可靠的分子标记。为研究家蚕vasa样基因（Bombyx mori vasa-like gene,Bmvlg）启动子在时空上的调控机制，通过PCR克隆了家蚕Bmvlg的启动子，构建了由Bmvlg启动子驱动报告基因DsRed的表达载体，并利用家蚕BmN细胞和蚕卵进行了瞬时表达研究。序列分析结果显示
脱氧羟腐胺赖氨酸合酶和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶是催化真核翻译起始因子序列中羟腐胺赖氨酸合成的两个酶。羟腐胺赖氨酸的合成是真核翻译起始因子活化成熟的标志，对真核细胞的存活及增殖具有重要作用。本文利用生物信息学、RACE和RT-PCR等方法克隆了家蚕脱氧羟腐胺赖氨酸合酶和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶的同源基因BmDHS和BmDOHH，分析了基因结构和表达谱。BmDHS和BmDOHH的cDNA全长分别为1311
基于丰富蓖麻蚕微孢子虫分子生物学信息的目的，用特异性PCR方法扩增克隆了其核糖体基因全序列，全长4314bp。包括核糖体大亚基基因（LSUrRNA）2497bp，内转录间隔区（ITS）188bp，核糖体小亚基基因（SSUrRNA）1232bp，基因间隔区（IGS）282bp和5S区域115bp。研究结果同时表明，蓖麻蚕微孢子虫与家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）、斜纹夜蛾微孢子虫（No
我们成功构建了柞蚕Antheraea pernyi蛹的全长cDNA文库。总RNA提取自处于滞育后期的单个新鲜雌蛹。所构建文库的滴度是5×105cfu/ml，重组率达到95％。表达序列标签（EST）测序得到了250个有效序列，它们可以聚成175个单基因簇，其中包括24个重叠群和151的单拷贝。生物信息学分析结果表明，这175个单基因簇中有97个（55.4％）在数据库中有同源序列（其中只有5个是柞蚕已
为阐明家蚕生殖发育的调控机制，在家蚕基因组、EST数据以及芯片数据分析的基础上，本文对果蝇中已报道的生殖质决定相关基因在家蚕中的同源基因进行了鉴定，从FlyBase下载果蝇生殖质形成相关基因18个，通过与家蚕基因组数据进行BLAST比对分析，发现13个基因在家蚕中均有同源基因，并对其表达模式进行了分析。然后对高度保守的mago nashi基因进行了克隆和原核表达。克隆的mago nashi基因完整
本文旨在探讨家蚕幼虫马氏管的蛋白质组及其免疫功能。我们构建了重组BmNPV-EGFP，注射感染家蚕，调查病毒在各组织感染时相（以呈现EGFP为指标）；以呈现EGFP的马氏管为材料，采用双向电泳(2-DE）技术对其蛋白组进行了分离与差异分析。结果表明，病毒在各组织感染时相先后为血细胞（72hpi），后部丝腺（72hpi），气管（84hpi），脂肪体组织（84hpi）,马氏管（96hpi），中肠（96
本研究试图通过比较添毒和未添毒菊酯的家蚕脂肪体中蛋白质表达谱，获得家蚕对溴氰菊酯抗性相关蛋白，ImageMaster 6.0软件分析结果表明，实验组和对照组中显著差异的点为48个，大部分蛋白在实验组中减量表达，只有一种蛋白在实验组中增量表达，取差异最显著的点质谱鉴定。对照组的蛋白数量明显高于实验组，可能是实验组中相关蛋白受到抑制。本研究为从蛋白质水平上研究家蚕的抗性打下基础，也为蚕作安全提供一定参
为了通过重组杆状病毒在家蚕中表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位（UreB），将UreB基因克隆至pFastBacDual载体构建了pFastBacDual-UreB供体载体，该载体转化E.coliBmDH10Bac，通过筛选和鉴定获得了重组Bacmid-UreB；提取重组Bacmid-UreB DNA，转染BmN细胞获得重组杆状病毒BmNPV-UreB；取感染重组杆状病毒96h的蚕蛹血淋巴进行SDS-P