目的利用CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术结合胚胎显微注射技术制备HBB基因敲除的β-地中海贫血家兔模型,为β地贫病人来源的i PS基因修复后再分化获得的造血干细胞移植治疗β地贫的安全性和有效性评估提供理想的动物模型。方法针对家兔HBB基因1号外显子设计1条g RNA靶位点并构建Cas9/g RNA载体,体外转录获得Cas9和g RNA的m RNA注射入兔受精卵中,移植发情受体母兔输卵管中待其自然妊娠即可获得HBB基因敲除的β-地贫家兔模型,对其进行基因型和贫血表型进行检测。结果将Cas9(100ng)、g RNA(10ng)显微注射至353个家兔受精卵,共移植10只受体母兔,有3只怀孕并出生4只HBB基因敲除嵌合体家兔,T-A克隆测序显示分别敲除7bp、10bp、1bp和6bp。血常规检测四只β地贫家兔模型都有显著的地贫表型,红细胞中也检测到大量异常的低色素性小细胞。结论利用CRISPR/Cas9技术获得的HBB基因敲除家兔具有显著的地贫表型,将为利用基因修复后β地贫病人来源i PS细胞诱导分化的造血干细胞移植提供理想的动物模型,对临床前造血干细胞移植的安全性及其对β-地贫家兔症状的改善作用进行检测和评估。