【摘 要】
：
本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A的突变，gp45基因区提前出现了一个终止密码子TGA，即出现过早停止编码突变(Premature stop codon)，造成gp45基因对应的TM
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江 哈尔滨 150001；东北林业大学 野生动物资源学院，黑龙江 哈尔滨 150040
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
论文部分内容阅读
本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A的突变，gp45基因区提前出现了一个终止密码子TGA，即出现过早停止编码突变(Premature stop codon)，造成gp45基因对应的TM蛋白的截短。Western blot检测FDDV的裂解产物中有截短型TM的存在；用FDDV接种了3匹经琼脂免疫扩散检测确定为EIA阴性的马匹，在免疫后第15d和40d，分别对免疫马匹外周血单个核细胞中EIAV前病毒DNA和血浆中游离病毒粒子的基因组gp45核酸序列进行了分析。研究结果定性地说明gp45基因出现的过早停止编码突变并非致死性突变，其对应表达的胞浆区截短型TM蛋白可参与构成完整的病毒粒子。且这种病毒颗粒可以对马造成感染，并可在体内进行长时间复制。
其他文献
本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2TCID50的猪瘟病毒和1.8TCID50的北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒，比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测，73份为
miRNA是一类内源性的长约21nt～25nt的短序列非编码单链RNA，可以通过部分互补或者完全互补结合到目的靶mRNA，以诱发蛋白质翻译抑制(翻译抑制子)或者介导目的mRNA的降解调节基因表达。根据这一特性，设计靶向禽流感病毒的miRNA编码序列，使之与靶mRNA完全互补。将其克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中，构建单个或多个串联miRNA表达载体，分别为pcDNA6.2
本实验对8个规模化猪场的52头疑似PMWS的断奶仔猪，应用PCR方法检测PCV2病原，对检测PCV2呈阳性具有典型PMWS病症的发病猪，分别应用PRRS、CSF RT-PCR试剂盒和PRPCR试剂盒进行了PRRS、CSF、PR病原的检测，结果显示总混感率高达87.2％。39份PCV2阳性病料中，二重感染23份，混感率59％，其中PCV 2与PRRSV混感率30.8％，PCV 2与CSFV混感率23
本研究通过对我国养猪业危害严重的四种重要病毒病：猪瘟(CSFV)、猪口蹄疫(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合症(PRRSV)和猪流感开展特异引物和探针的设计、靶基因扩增和克隆、芯片杂交与反应条件优化等实验，筛选出四条敏感性好、特异性高的探针用于猪重要病毒病检测基因芯片的制备，同时开展了探针的优化实验，确立了不对称PCR引物浓度比例，为建立猪重要病毒病基因芯片诊断技术平台奠定了基础。
为建立一种简便快速适于基层推广应用的猪囊尾蚴抗体检测工具，本研究以胶体金颗粒标记纯化的猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白，将兔抗TSOL18-IgG和TSOL18抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上，研制出猪囊尾蚴病快速诊断试纸条。用该试纸条对16头份人工攻虫感染猪进行猪囊尾蚴抗体检测，同时与剖检计数法和全囊抗原ELISA作对比，结果试纸条法与剖检计数法和全囊抗原ELISA的相对敏感性分别
应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和兔体交叉试验，对采自山东、安徽、苏北等不同地区的疑似猪瘟病料进行检测，显示出RT-PCR诊断技术快速、便捷、准确的特点，提示一些猪场非典型猪瘟感染率比较高，并就此提出加强免疫监测，加大猪瘟免化弱毒疫苗的免疫剂量，果断淘汰感染母猪等综合性防制措施。
本研究扩增了霍乱弧菌封闭带毒素ZOT基因编码264～399氨基酸残基的C末端△G功能片段，插入表达质粒pBCX，构建了表达△G片段的融合蛋白表达载体pBCX-△G。将重组质粒转入表达菌BL21(DE3)中，在终浓度1mmol/LIPTG诱导下进行表达，表达的融合蛋白△G分子量约为45ku。用50％Ni-NTA蛋白纯化树脂以非变性方法纯化融合蛋白△G，获得了纯度较高的蛋白△G。融合蛋白ΔG与H5N1
本研究选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04Ⅴ F110和tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ F115，研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析，研究了CK/CH/LDL/97Ⅰ与其他病毒的基因型关系。证明CK/CH/LDL/97Ⅰ属于有别于其它IBV毒株
参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以PRVJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约113kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了vp6的1320bp全基因序列；将其ORF与国内外9株PRV vp6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较，核苷酸同源性在77.11％～91.11％之间,氨基酸的同源性在
本研究将我国H7亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/1/02(H7N2)的HA基因克隆到质粒pSY538上，把含有禽痘病毒启动子P11的LacZ基因亚克隆到质粒pSY538-HA7的SmaⅠ位点，然后切下同时含有HA和LacZ基因的片段再克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotⅠ位点，构建出禽痘病毒转移载体pSY681-HA7-LacZ，将此重组质粒与亲本禽痘病毒S-FPV-017共