目的 探索体外分离培养及纯化大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)及胰岛细胞的方法.方法 采用贴壁分离和消化控制相结合的方法,分离纯化3～4周龄大鼠MSCs,免疫细胞化学法鉴定其活性和表型.DAPI标记细胞核.选用SD大鼠经胆总管逆行灌注胶原酶液,分离消化胰腺组织,用淋巴细胞分离液(histopague-1077)纯化胰岛细胞.培养一周后用双硫腙(DTZ)行胰岛细胞鉴别.用丫啶橙(A0),碘丙啶(PI)监测胰岛细胞活性.结果 原代培养的BMSCs呈圆形、梭形、多角形等,24H内即可见少量细胞体贴壁伸展,7-8d左右可达90％融合,纯化后的BMSCs呈均匀一致的长梭形,24h内细胞贴壁率99％,传代周期为7d左右.结果显示第3代MSCs的特异性表面标志物：CD45-/CD29+/CD44+,CD29+、阳性率为98.9％,CD44+、阳性率为73.3％.DAPI标记的BMSCs,胞核可见明亮蓝色荧光.标记率达100％.DTZ鉴定胰岛细胞纯度为80％,AO/PI鉴定胰岛细胞存活率为90％以上.结论 贴壁分离和消化控制相结合能有效分离纯化成年大鼠BMSCs,细胞纯度较高,细胞活力强,生物学性状稳定,是目前一种比较理想的分离纯化方法.应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的方法是一种操作简单的大鼠胰岛纯化方法.经培养后能获得纯度较高的胰岛细胞.