【摘 要】
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以脊尾白虾为研究对象，构建了其受精卵离体孵化、显微注射等基本实验操作平台；实现了体外转录绿色荧光蛋白EGFP mRNA在脊尾白虾胚胎中的表达；以脊尾白虾几丁质酶4基因(EcChi4)为靶标基因，利用CRISPR/Cas9技术对EcChi4第四个外显子的一段靶序列进行了敲除，结果大约50％的存活仔虾在对应靶向位点发生了indels突变；在产生的突变体中筛选出EcChi4对应靶向位点缺失5个碱基(靶标
【机 构】
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中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室,青岛266071;青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室,青岛266000
【出 处】
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第十届世界华人虾蟹养殖研讨会暨2016年中国河蟹产业发展高峰论坛
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以脊尾白虾为研究对象，构建了其受精卵离体孵化、显微注射等基本实验操作平台；实现了体外转录绿色荧光蛋白EGFP mRNA在脊尾白虾胚胎中的表达；以脊尾白虾几丁质酶4基因(EcChi4)为靶标基因，利用CRISPR/Cas9技术对EcChi4第四个外显子的一段靶序列进行了敲除，结果大约50％的存活仔虾在对应靶向位点发生了indels突变；在产生的突变体中筛选出EcChi4对应靶向位点缺失5个碱基(靶标基因发生移码突变)的嵌合体，进而利用遗传学手段获得了稳定遗传的脊尾白虾EcChi4基因敲除模型。目前该基因敲除模型已经培育至第三代(G3)。为进一步拓宽CRISPR/Cas9技术在脊尾白虾基因组编辑中的应用范围，作者在Cas9重组蛋白的制备、基于U6启动子转录gRNA的质粒构建、基于Hsp70启动子转录Cas9的质粒构建等方面开展了一系列工作。该研究对深入开展十足目甲壳动物重要功能基因的研究及基于基因编辑技术的分子育种均具有重要的理论意义和实践意义。
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