前言 猪圆环病毒感染是由猪圆环病毒2型引起的一种严重危害养猪业发展的新发传染病,以断奶仔猪生长发育不良、呼吸困难、皮下淋巴结高度肿大、出血和坏死,母猪繁殖障碍为主要特征。本研究构建PCV2 CC12毒株基因组。材料与方法以长春市某猪场爆发的疑似猪圆环病毒2感染发病猪的脾脏和淋巴结为材料,提取组织的DNA或总RNA,应用PCR/RT-PCR扩增PCV2的基因组,并将其克隆到pBluescript Ⅱ SK载体,构建PCV2 CC12基因组重组质粒,然后以LF2000将重组质粒转染到PK15细胞,通过PCR、TCID50测定、免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫荧光技术和免疫印迹技术检测病毒基因序列或病毒编码蛋白,进而确定PCV2 CC12是否拯救成功。结果与讨论 应用酶切和序列测定,确定成功构建出CC12病毒的完整基因组重组质粒。构建的感染性克隆以脂质体介导方法转染PK15细胞后,应用PCR方法、IFA、IPMA和Western blot检测到病毒核酸分子和病毒Cap结构蛋白表达,表明CC12毒株拯救成功。拯救出的CC12毒株(rCC12)与亲本病毒具有相似的TCID50病毒滴度和生物学特性,为进一步研究病毒的复制、病毒的致病机理与免疫打下基础。结论 本研究构建出CC12病毒基因组的感染性克隆,通过转染成功拯救出rCC12病毒,拯救病毒与亲本毒株具有相似的生物学特性,为进一步研究病毒的复制、病毒的致病机理与免疫提供平台和打下基础。