微生物农药由于具有广泛的生产原料,防治对象不易产生抗药性,对环境友好等特点,而逐步成为生物防治的支柱产业。本文以球孢白僵菌(Bassiana bassiana)和蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)两种虫生真菌为主要研究对象,研究通过克隆球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌的几丁质酶基因,并在大肠杆菌中原核共表达,研究融合蛋白的抑菌活性。由于它们来源不同的菌株,二者结合使用可以作为一种新型生物农药应用于病虫害防治。根据球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌的序列信息设计引物,通过PCR的方法,克隆得到球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌的几丁质酶基因,球孢白僵菌几丁质酶基因全长1 047bp,蜡蚧轮枝菌的几丁质酶基因全长1 272bp,分别构建几丁质酶基因原核表达载体,转入大肠杆菌BL21原核表达,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白正常表达,并且发现在大肠杆菌BL21中蛋白表达量在4h达到最大。并且将构建球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌的几丁质酶基因融合表达在大肠杆菌BL21中,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白正常表达,并且发现在大肠杆菌BL21蛋白表达量在4h达到最大。通过对峙培养法测定三种蛋白裂解液对玉米大斑病菌和核盘菌的抑菌活性;测定了不同浓度蛋白裂解液对玉米大斑病菌菌丝生长的抑制效果;采用离体叶片法,测定不同浓度蛋白裂解液对玉米叶片上的玉米大斑病的防治效果。同时还测定了不同浓度蛋白裂解液对大豆核盘菌菌丝生长的抑制效果;同时测定不同浓度蛋白裂解液对番茄叶片上的大豆核盘菌的抑制效果。结果表明,球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌几丁质酶蛋白的抑菌活性无显著差异,但是其融合表达的几丁质酶抑菌活性显著高于单独表达的几丁质酶活性。本研究将球孢白僵菌和蜡蚧轮枝菌在大肠杆菌BL21中融合表达,增强了它们的抑制活性,减少了多次性发酵成本。初步探索了两种真菌几丁质酶基因融合表达蛋白,具有抑制玉米大斑病菌和核盘菌的活性,为融合蛋白的抑制病虫害方法的研究提供了理论基础,为生物农药的发展提供了有新的材料和思路。