源于金环蛇的一种抗菌肽Cathelicidin-BF对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用研究

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抗菌肽作为一种重要的先天免疫分子,具有促进损伤修复,调节微生物生长与炎症,抗肿瘤等功能。Cathelicidin-BF(C-BF)是从金环蛇毒液中分离提取出来的一种抗菌肽,具有广谱抗菌活性。溃疡性结肠炎是一种常见的肠道炎性疾病,其发病机制尚不清楚。本实验的目的是研究抗菌肽C-BF对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的保护作用。实验分为四组:对照组,DSS组,C-BF组,C-BF+DSS组,通过自由饮用3%DSS溶液建立结肠炎模型,通过直肠注射C-BF的方式予以给药,实验期为7天。实验通过HE染色,免疫组化,流式分析等方法,分析C-BF是否对溃疡性结肠炎小鼠具有保护作用。实验成功建立溃疡性结肠炎症模型,进一步研究结果发现,与DSS组比,C-BF+DSS组的疾病活动指数显著下降,组织切片的结果表明,C-BF+DSS组回肠和结肠段肠上皮形态结构得到显著改善,同时通过流式细胞术分析发现与DSS组相比,CBF+DSS组显著提高了血液中B,T淋巴细胞和巨噬细胞的比例(P<0.05),且分别通过ELISA和荧光定量PCR分析发现,C-BF+DSS组显著降低了促炎因子TNF-α,IL-6,IL-8和抑炎因子IL-10在血清中的蛋白表达及在结肠处的基因表达水平(P<0.05)。通过免疫组化分析,发现与DSS组相比,C-BF+DSS组显著缓解了噬中性粒细胞和巨噬细胞对结肠黏膜层的入侵,Tunnel分析结肠上皮细胞凋亡情况,发现C-BF+DSS组与DSS组比较,其结肠上皮细胞凋亡程度得到显著缓解(P<0.05)。检测结肠处的炎性相关酶COX-2和INOS的酶活发现,C-BF+DSS组与DSS组比其炎性相关酶活显著降低(P<0.05),同时,通过Western-blot检测经典炎性相关信号通路,发现加入C-BF后,可以缓解NF-κB(p65)的磷酸化水平,提示抗菌肽C-BF可能是通过NF-κB(p65)相关信号通路缓解溃疡性结肠炎性症状。本试验结果显示:抗菌肽C-BF可通过免疫调节途径缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎,且初步的研究结果表明其缓解炎症的机制为通过降低NF-κB的磷酸化水平实现。
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