【摘 要】
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LEAP-2(Liver expressed antimicrobial peptide-2)抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用的碱性小分子肽，它们在机体免疫系统中发挥了重要作用，被认为是抗生素的理想替代品.本研究以既有的斑点叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)LEAP-2 成熟肽的原核表达载体pET-32a-mLEAP2为模板，通过PCR扩增在3和5端分别添加EcoRⅠ和No
【机 构】
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上海海洋大学,食品学院,上海 201306
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LEAP-2(Liver expressed antimicrobial peptide-2)抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用的碱性小分子肽，它们在机体免疫系统中发挥了重要作用，被认为是抗生素的理想替代品.本研究以既有的斑点叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)LEAP-2 成熟肽的原核表达载体pET-32a-mLEAP2为模板，通过PCR扩增在3和5端分别添加EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的成熟肽的cDNA片段；以pPIC9K 为真核表达载体，构建“pPIC9K-mLEAP2” 重组表达载体；电转化进毕赤酵母 GS115 中，经不同浓度 G418 和选择性培养基筛选以及对酵母基因组 DNA 的PCR 鉴定，得到高拷贝酵母转化子；在29 ℃、以 0.5％的甲醇诱导表达不同时间后，经 Tricine-SDS-PAGE 分析，表明发酵培养120h 时目的蛋白的表达量最高，达 2.7mg/L.发酵上清经 IMAC 亲和层析后获得高纯度的目的蛋白.通过MALDI/TOF/TOF 鉴定，证明重组体mLEAP-2 被成功获得.本研究为LEAP-2 抗菌肽的生物学活性研究奠定了良好的基础.
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