【摘 要】
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目的：研究不同种属口腔细菌间的相互粘附作用对于了解口腔微生物群落的种属间作用十分重要.目前关于该课题的认知主要基于已知的可培养细菌的配对共凝集实验.本研究联合使用膜结合法和聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)系统性研究口腔细菌的相互粘附谱.材料和方法：以两种口腔细菌作为"基础菌"：已知能与多数口腔细菌粘附的具核梭杆菌以及粘附对象研究尚不多的变异链球菌."基础菌"固定于硝酸纤维膜,漂
【机 构】
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四川大学华西口腔医学院 School of Dentistry, University of Ca
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目的：研究不同种属口腔细菌间的相互粘附作用对于了解口腔微生物群落的种属间作用十分重要.目前关于该课题的认知主要基于已知的可培养细菌的配对共凝集实验.本研究联合使用膜结合法和聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)系统性研究口腔细菌的相互粘附谱.材料和方法：以两种口腔细菌作为"基础菌"：已知能与多数口腔细菌粘附的具核梭杆菌以及粘附对象研究尚不多的变异链球菌."基础菌"固定于硝酸纤维膜,漂洗封闭后加入混合菌悬液(包括已知细菌或天然唾液细菌),共同孵育后洗去未结合细菌,最后用0.2mol/L甘氨酸洗脱结合细菌,提取基因组DNA,针对16srRNA进行PCR扩增,DGGE分离PCR产物.对条带进行选择性切胶回收,测序后通过不同数据库的核酸BLAST检索进行鉴定.结果：能与变异链球菌粘附的细菌种属较少,而具核梭杆菌则能与众多种属的细菌粘附,包括一些之前被认为不可培养的细菌.结论：本实验所采用的方法能更有效地分析口腔细菌的相互粘附谱,能促进口腔微生物种属间粘附的研究.
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目的：本实验通过构建变形链球菌UA159 comD基因缺陷株,探讨comD基因对变形链球菌UA159致龋毒力的影响.方法：1.应用长臂同源多聚酶链式反应法(LFH-PCR)制备中间为红霉素耐药基因(erm),两侧为comD基因上、下游同源序列的连接片段,并转入变形链球菌UA159标准株,在含红霉素的BHI琼脂平板上筛选出转化菌株,对转化菌株进行形态学鉴定、生化特性检测、PCR、RT-PCR及测序鉴
目的：初步研究生物膜中耐酸因子质子移位膜ATP酶(membrane-bound proton-translocating ATPase,F-ATPase,)在体外口腔生物膜模型不同pH条件下基因水平的表达特点,探索F-ATPase在龋病发生中的调节作用和致病机理.方法：变异链球菌(S.mutans)UA159、血链球菌(S.sanguis)ATCC10556、远缘链球菌(S.sobrinus)AT
目的：构建变形链球菌luc基因荧光报告株,评价荧光报告株与野生菌株生长能力、生物膜形成能力的差异.方法：采用PCR法从变形链球菌基因组中扩增出目的片段,克隆至自杀质粒pFW5-luc中,构建pJM1-Idh载体,将其转化到变形链球菌UA 159中发生同源重组,筛选重组成功的变形链球菌luc基因荧光报告株；采用生长曲线、扫描电镜、活菌菌落计数等方法研究浮游态及生物膜状态下荧光报告株的生长活性及代谢状
目的：观察外源性右旋糖酐酶及氟化钠对成熟变形链球菌单菌种生物膜的降解效果,观察生物膜结构的改变,探讨二者是否具有协同作用,并分析可能的作用机制。方法：变形链球菌在厌氧培养条件下培养24h,于玻璃片表面上形成成熟单菌种生物膜后,更换含各种不同浓度右旋糖酐或/和氟化钠的培养基,厌氧条件下培养过夜(约12h)。用荧光染料BOBOTM-3和Calcofluor TM对生物膜进行染色,利用激光共聚焦显微镜观
目的：应用PCR-变形梯度凝胶电泳(DGGE)技术,对老年人根面龋牙菌斑进行群落分析研究,以了解根面龋微生境构成及其多样性。方法：提取9名60岁以上老年人根面龋牙菌斑细菌DNA,选用细菌16s rDNA基因V3区通用引物对其进行扩增、克隆、测序并与核酸序列数据库进行比对,鉴定优势菌属种类,构建系统发育树。结果：老年人根面龋牙菌斑中的优势菌属包括：不动杆菌属、放线杆菌属、放线菌属、Aggregati
目的：通过提取根面牙本质中的非胶原蛋白，分析比较提取前后对根面龋再矿化效果的比较，进一步研究五倍子多酚化合物在根面龋中再矿化中的作用。方法：体外37度恒温箱中，形成不同脱矿形态的28个牛牙样本，用盐溶液提取非胶原蛋白后，在恒温箱中用五倍子多酚化合物和脱矿液对根面龋进行脱矿再矿化循环七日，用偏光显微镜进行定性观察，对实验样本进行荧光染色，激光共聚焦扫描显微镜测量分析荧光强度。结果：五倍子多酚化合物能
目的：比较3-5岁不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株在不同pH条件下葡糖基转移酶活性的差异.方法：以高龋、中龋和无龋儿童口腔中分离得到的变异链球菌不同基因型菌株为实验菌株,常规复苏、增菌,配制相同密度的菌悬液,加入不同pH值(以0.5为间隔,pH5.0～7.0)的含0.25％葡萄糖和0.05％ Tween 80的TYC培养基中,采用Neson-Somogyi法,观察变异链球菌葡糖基转移酶活
目的：本研究主要检测致龋菌变异链球菌在不同饥饿状态下的生存能力,并检测饥饿态变链菌抵抗两种常用防龋剂氟化钠和洗必泰及酸的能力.方法：我们通过活菌平板计数法检测变链菌在无菌水、PBS、无菌唾液、7.4g/L的脑浸心液(BHI)和37g/L BHI液中的生存能力.通过微孔板滴定法检测正常状态下氟化钠和洗必泰对变链菌的最小抑菌浓度(Minimal bactericidal concentration,M
目的：初步探讨新疆乌鲁木齐市维吾尔族和汉族不同龋敏感儿童变形链球菌乳酸脱氢酶(LDH)活性与儿童乳牙龋发生的关系，筛选不同乳酸脱氢酶活力菌株.方法：从维吾尔族和汉族高龋、无龋个体分离变形链球菌各20株，应用考马斯亮蓝蛋白定量方法对菌细胞裂解液蛋白进行定量，通过还原性辅酶Ⅰ氧化法测定LDH活性，比较各组菌株LDH活性差异以及不同LDH活性的菌株在四组人群的分布，使用SPSS13.0软件包对实验结果进
目的：观察本课题组培育的防龋用转基因番茄中外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB是否通过花粉和根系分泌物造成基因漂移,初步探讨该转基因番茄防龋疫苗的生态安全性.方法：田间种植转基因番茄,距转基因植株的边缘0.5m、1m、3m、10m处种植非转基因对照番茄作为基因漂移的受体,开花期自由授粉,结果期在距离转基因番茄植株边缘0.5m、1m、3m、10m处,随机分别收取10株番茄果实,采集种子