NK细胞是一群重要的固有免疫细胞,可直接识别并杀伤体内癌变及病毒感染的细胞。在白血病的治疗过程中,同种异体的骨髓移植是一种重要的治疗手段,但骨髓移植后随之产生的GVHD效应极大程度上限制了骨髓移植的应用。早有研究证明NK细胞是骨髓移植后较早出现的细胞,且具有杀伤白血病细胞的能力,不引起GVHD效应。根据美国clinical trails官方网站提供的数据,NK细胞临床治疗的数量已达到60多项,因而关于NK细胞的临床细胞治疗正逐步得到重视。在应用NK细胞的临床治疗时,NK细胞的数量以及治疗的有效性及适应性仍是一个值得思考的话题,故而我们根据以上问题进行相关的研究。首先,我们建立了一种体外大规模分化扩增NK细胞的方法。应用MACS分选的方法,从脐血单个核细胞中分离CD34+细胞,保证其纯度达到90%以上,尔后通过多种细胞因子组合刺激培养,使得CD34+细胞逐步分化扩增为NK细胞。经过五周的培养,细胞可扩增1000~2000倍,且NK细胞的比例达到95%以上。体外分化扩增的NK细胞可分泌大量的效应性分子IFN-γ、Perforin及Gran B,并可有效杀伤K562、HL-60等细胞系。NK细胞表面有大量的活化性受体及辅助性受体,NK细胞能够有效的发挥效应,需要多种受体的组合刺激活化。我们发现,较于实体瘤细胞系,血液系统肿瘤细胞系高表达SLAM家族的配体,所培养的NK细胞表面高表达相应SLAM家族受体,以及活化性受体NKG2D、NCR家族的受体,SLAM-SLAML受配体结合介导NK细胞的杀伤功能。我们期望通过本课题的研究,能够一定程度上为NK细胞的临床治疗奠定基础,提高NK细胞治疗的有效性。