【摘 要】
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钙调神酸酶(CN)是由催化亚基A(CNA)和调节亚基B(CNB)组成的异源二聚体,A亚基的磷酸酶活力受控于两种功能上截然不同、但结构相似的Ca2+调节蛋白钙调素和B亚基.全酶的晶体结构
【机 构】
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北京师范大学生物化学与分子生物学系,北京,100875
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钙调神酸酶(CN)是由催化亚基A(CNA)和调节亚基B(CNB)组成的异源二聚体,A亚基的磷酸酶活力受控于两种功能上截然不同、但结构相似的Ca2+调节蛋白钙调素和B亚基.全酶的晶体结构揭示了B亚基的N末端与C末端和A亚基的N末端均有一个不参与活性中心的长臂.本文利用两对分别含有10个和6个甘氨酸密码子的接头引物扩增了钙调素、B亚基和A亚基三元复合物的融合基因,构建了单链型的钙调素/钙调神经磷酸酶的高校表达体,并且纯化了这种三元复合物.单链复合物对小分子底物对硝基苯酚磷酸(pNPP)和磷酸化的特异性多肽底物RⅡ均表现出了很高的磷酸酶活性,与受钙调素激活的天然牛酶具有相似的理化性质和动力学参数,Vmax与Km分别为5000nmol/(minmg)和70mM.它不受额外B亚基和钙调素的调节,但仍受Mn2+、Ni2+、Mg2+等二价金属离子的强烈刺激,分别在1mM、5mM、100mM达到最大值.这些结果暗示钙调素、B亚基和A亚基三者的融合并没有影响到它们各自的折叠途径以及涉及它们功能的结构变化,并且两种Ca2+调节蛋白钙调素和B亚基与A亚基在正确的空间位点得以结合.
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