论文部分内容阅读
目的：以“合募配穴”中医针灸理论为指导，从脊髓水平强啡肽（Dynorphin，Dyn）系统探讨温和灸天枢、上巨虚穴缓解肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）慢性内脏痛的镇痛机制。方法：采用乳鼠直结肠扩张（colorectal distention，CRD）刺激制备 IBS慢性内脏痛大鼠模型。①大鼠随机分为正常组、模型组、i.t.Dyn组、i.t.生理盐水（Normal saline，NS）组、i.t.κ受体拮抗剂（nor-Binaltorphimine，nor-BNI）组、i.t.Dyn+nor-BNI组。i.t.Dyn、i.t.NS、i.t.nor-BNI、i.t.Dyn+nor-BNI组，于大鼠出生后第36天分别给予鞘内注射Dyn、NS、nor-BNI、Dyn+nor-BNI。干预结束后，采用腹部撤回反射（abdominalwithdrawl reflex，AWR）评分作为检测大鼠内脏痛的行为学指标。②大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、i.t.nor-BNI+艾灸组、i.t.Dyn+艾灸组、i.t.nor-BNI组、i.t.Dyn组。艾灸组大鼠出生后第36-42 天接受温和灸双侧天枢、上巨虚穴干预；i.t.nor-BNI+艾灸、i.t.Dyn+艾灸组，于每次艾灸干预前15分钟分别给予i.t.nor-BNI、Dyn；i.t.nor-BNI、i.t.Dyn组大鼠每天同一时间分别给予i.t.nor-BNI、Dyn。所有干预结束后，采用AWR 评分作为检测内脏痛的行为学指标。③大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、假艾灸组，艾灸组、假艾灸组大鼠出生后第36-42 天分别接受温和灸与假温和灸干预。所有干预结束后，采用AWR 评分作为检测内脏痛的行为学指标；采用原位杂交法观察L6-S1 脊髓节段前强啡肽原 (Preprodynorphin, PPD) mRNA、κ受体mRNA的表达；免疫组织化学法观察相应脊髓节段Dyn的表达；酶联免疫法（Enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）检测相应脊髓节段 Dyn的浓度。结果：①在不同强度（20、40、60、80mmHg）的内脏痛诱发刺激下，与正常组大鼠相比，模型组AWR 评分上升（P<0.01），与模型组相比，i.t.Dyn组大鼠AWR 评分降低（P<0.01），与i.t.Dyn组相比，i.t.Dyn+nor-BNI组大鼠AWR 评分升高（P<0.05）。②与模型组相比，艾灸组大鼠AWR评分降低（P<0.01）；在一定强度的内脏痛诱发刺激下，与艾灸组相比，艾灸+i.t.nor-BNI组大鼠AWR评分升高（P<0.01），艾灸+i.t.Dyn组大鼠AWR评分降低（P<0.01）。③与正常组相比，模型组大鼠脊髓背角PPD mRNA、Dyn、κ受体mRNA 阳性表达总面积与OD值、Dyn含量均明显增加（P<0.01, P<0.05）；与模型组相比，艾灸组大鼠PPD mRNA、Dyn、κ受体mRNA 阳性表达总面积与OD 值、Dyn 含量均升高（P<0.01, P<0.05）。结论：艾灸镇痛作用能被i.t. nor-BNI部分阻断，且能被鞘内注射Dyn 加强，提示脊髓水平 Dyn系统参与艾灸镇痛过程。温和灸天枢、上巨虚穴促进慢性内脏痛大鼠L6-S1脊髓节段Dyn的合成、κ受体mRNA的表达，提示温和灸通过激活脊髓水平Dyn系统是实现镇痛作用。