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目的:建立一种狂犬病的快速检测法。
方法:根据狂犬病病毒核蛋白基因的保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针建立荧光定量RT-PCR。构建了荧光定量RT-PCR绝对定量的标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。
结果:实验成功构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.9980狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测反应的灵敏度为10个TCID50;5种非狂犬病病原体检测均为阴性。
结论:本实验建立的检测狂犬病病毒的方法快速、特异性强、灵敏度高,稳定性好。