【摘 要】
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目的：富血小板纤维蛋白(PRF)可以缓慢释放的生长因子,并对骨组织愈合中起促进作用,然而其制作后必须即刻应用、无法长期保存以及生长因子无法定量收集等特点限制了其应用.冻干法可以通过使样本中的水分直接升华而改变其物理性状.本文旨在通过冻干法制备PRF,检测其是否可以长期保存,并对其生长因子进行收集,定量.方法：抽取10名健康无吸烟使志愿者静脉血,离心制备20枚PRF.实验组：10枚PRF经冻干机冻干
【机 构】
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北京市首都医科大学宣武医院口腔科 100053
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目的：富血小板纤维蛋白(PRF)可以缓慢释放的生长因子,并对骨组织愈合中起促进作用,然而其制作后必须即刻应用、无法长期保存以及生长因子无法定量收集等特点限制了其应用.冻干法可以通过使样本中的水分直接升华而改变其物理性状.本文旨在通过冻干法制备PRF,检测其是否可以长期保存,并对其生长因子进行收集,定量.方法：抽取10名健康无吸烟使志愿者静脉血,离心制备20枚PRF.实验组：10枚PRF经冻干机冻干24h；对照组：10枚新鲜PRF.实验组与对照组PRF均采用常规固定方法固定24h,梯度脱水,喷金,扫描电镜(SEM)观察两组样本的表面形貌；将实验组及对照组样本置于6孔板中,加入DMEM培养基37C恒温孵箱内孵育,于第1、2、3、4、5、6、7、14、21天提取条件培养基,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组样本内生长因子TGF-β 1和PDGF-AB及IGF-1的释放规律.结果：电镜图片显示实验组冻干PRF的结构更疏松,纤维条索较细且轮廓清晰,纤维条索之间有大量的孔隙和空洞；对照组新鲜PRF的结构紧实,纤维条索不明显,没有明显的孔隙和空洞.ELISA结果显示实验组冻干PRF三种生长因子释放规律相似,均为第1天即达到生长因子的释放高峰,之后释放量迅速减少,TGF-β1和PDGF-AB在第5天几乎停止释放,IGF-I在第4天几乎停止释放.冻干PRF粉末的生长因子的释放呈现明显的突释状态,且第一天释放量显著高于新鲜PRF,且大部分来自于血清的IGF-I的总量明显高于对照组；对照组新鲜PRF内TGF-β 1和PDGF-AB的释放曲线较为相似,分别于第5天及第4天达到生长因子的释放高峰,随后逐渐下降,第14生长因子的释放量很少,第21天几乎检测不到生长因子.生长因子IGF-1则在第1天达到最大释放量,之后迅速降低,到第5天时,释放明显减少,7天后已检测不到生长因子的释放.结论：根据本实验结果,我们可以认为冻干PRF仍具有释放生长因子的功能.其通过冻干过程,不仅保留了PRF内血小板释放的生长因子,并且还保留了血清部分中的生长因子.通过冻干法可以有效的保存PRF,同时其内部生长因子的这种突释作用为生长因子的进一步收集及后期应用提供便利.冻干PRF呈现疏松多孔洞结构,纤维蛋白条索清晰明显且条索较细.新鲜PRF的纤维蛋白结构紧实,蛋白条索不清晰.电镜下的这种结构表明冻干PRF在微结构上有明显的变化,也提示这种改变可能是影响PRF生长因子释放规律的原因之一.
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