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目的:通过对肝脏细胞线粒体功能、凋亡相关蛋白表达等的检测探讨山豆根及其主要毒性成分苦参碱对大鼠肝脏毒性的作用机制。方法:制备质量稳定可控的山豆根水提物浸膏粉,按0.5 g/kg、1.5 g/kg、4.5 g/kg(相当于生药材),苦参碱按200 mg/kg重复灌胃给予大鼠7天造成肝损伤。取给药7天的空白对照组、山豆根各剂量组及苦参碱组的肝脏组织,制备大鼠肝脏线粒体。JC-1染色法检测线粒体跨膜电位(△ψm)、荧光法检测线粒体内ROS生成速率、微孔板比色法检测NAD/NADH比值,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测山豆根及苦参碱各给药组大鼠肝细胞凋亡相关基因p53、p65、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9的表达水平;采用Western Blot法检测山豆根给药4.5 g/kg组及苦参碱组大鼠肝细胞促凋亡相关蛋白p53、Caspase 3、Caspase 9、Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,采用TUNEL法对肝细胞凋亡进行原位检测。结果:山豆根及苦参碱给药7天后,山豆根各剂量组及苦参碱组均能增加线粒体内ROS生成速率,山豆根1.5 g/kg、4.5 g/kg及苦参碱组能引起△ψm下降,NAD/NADH比值升高。对凋亡相关基因p53、p65、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9等的检测发现,山豆根各剂量组及苦参碱组的Caspase 9在mRNA水平上表达显著提高,山豆根0.5 g/kg、1.5 g/kg的Caspase 8在mRNA水平上的表达也有提高,但剂量-效应关系不如Caspase 9显著。各给药组p53、p65和Caspase 3在mRNA水平上的表达量未见显著增加。对线粒体诱导细胞凋亡途径的关键因子Bax、Bcl-2、p53、Caspase 3、Caspase 9进行蛋白质水平表达量的检测发现,山豆根4.5g/kg及苦参碱组均能增加上游促凋亡因子Bax的表达量,下调抑制因子Bcl-2的表达,对Caspase 9和Caspase 3的表达量没有明显影响,但其活性形式Cleaved Caspase 9和Cleaved Caspase 3的蛋白质表达量都有明显上升。采用TUNEL法对山豆根4.5g/kg及苦参碱组给药大鼠的肝组织切片进行原位细胞凋亡检测发现,山豆根4.5 g/kg及苦参碱组凋亡阳性细胞显著增加。结论:线粒体功能失调导致Bcl-2家族的调控作用失衡,引起Caspase活化的一系列级联反应,最终导致线粒体途径的肝脏细胞凋亡,可能是山豆根及苦参碱引起大鼠肝脏毒性的机制之一。苦参碱是山豆根主要的肝脏毒性成分。