支持细胞功能分子筛选及其对大鼠骨髓间充质干细胞分化调控影响

来源 :2012工业生物过程优化与控制研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kahn419
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  本文主要通过基因沉默技术来筛选和验证支持细胞中功能分子对骨髓间充质干细胞分化的调控作用。首先对支持细胞中的己报道过的功能分子进行基因沉默,然后证明其功能。主要选择了生长转化因子-β3(Transforming growth factor beta 3,TGF-β3)和胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)两因子,通过NCBI上的基因信息设计高效特异性的3-4条针对靶基因的siRNA,合成设计好的DNA并退火形成双链DNA,克隆到特异性载体上后转染导入支持细胞中后进行筛选。采用电转和脂质体转染两种转染方法优化后得到的转染率达到了8.9%。通过200ug/ml的G418浓度进行单克隆筛选,得到稳定的靶基因沉默的细胞。将筛选后的细胞与大鼠骨髓间充质干细胞进行共培养,在分析验证其对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)分化的促进作用。在此实验基础上,在支持细胞二级质谱分析结果的基础上筛选几种未知因子,利用RNA干扰技术可以进一步研究其对MSC细胞分化是否起到相关作用。
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