【摘 要】
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本研究旨在用原核表达系统对DAstV-1的衣壳蛋白进行截短表达,并制备高效价的特异性抗血清.用RT-PCR的方法扩增DAstV-1衣壳蛋白的N端(His-E1D)、中间部分(His-E2)和C端(His-E3)基因,分别构建原核重组质粒pET28a-E1D,pET28a-E2和pET28a-E3.将其转入Transetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达.SDS-PAGE结果显示成功获得重组蛋白
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,农业部动物流行病学重点实验室,北京100193
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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本研究旨在用原核表达系统对DAstV-1的衣壳蛋白进行截短表达,并制备高效价的特异性抗血清.用RT-PCR的方法扩增DAstV-1衣壳蛋白的N端(His-E1D)、中间部分(His-E2)和C端(His-E3)基因,分别构建原核重组质粒pET28a-E1D,pET28a-E2和pET28a-E3.将其转入Transetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达.SDS-PAGE结果显示成功获得重组蛋白.以纯化后的重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清.Western Blot和间接免疫荧光结果显示,His-E1D、His-E2和His-E3的抗血清可分别与相应的融合蛋白特异性识别,并均可识别在sf9细胞中表达的rPORF2.
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为筛选潜在的保护性抗原基因研制鸭源鸡杆菌(Gallibacteriumanatis,G.anatis)基因工程疫苗,参考GenBank中G.anatis UMN179的外膜蛋白A(Outer membrane protein A,OmpA)基因序列设计一对引物,对鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG株的ompA基因进行克隆,并应用相关软件和程序对其核苷酸及氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示om2
探索OmpW在鸭源鸡杆菌耐药性形成中的作用.运用M-V培养基诱导鸭源鸡杆菌自然感受态细胞,用含有氯霉素抗性(Cmpr)筛选标记和同源臂的线性DNA打靶片段替换目的基因;以PCR、SDS-PAGE及Western-blot鉴定阳性转化子ΔompW.通过微量稀释法测定12种抗菌药物对鸭源鸡杆菌亲本菌株RU和突变株ΔompW的最小抑菌浓度(MIC).鸭源鸡杆菌阳性转化子缺失了OmpW,成功构建了OmpW
为评价鸭源鸡杆菌(Gallibacteriumanatis,G.anatis)外膜蛋白A(Outer membrane proteins A,OmpA)的免疫原性及免疫保护力,本研究通过PCR技术扩增去除信号肽的ompA基因序列,酶切后与载体pET32a(+)连接,构建重组表达质粒pET32a(+)-OmpA,在IPTG诱导下成功表达约40kDa的包涵体蛋白.Wester blotting分析显示
参考GenBank中鸭源鸡杆菌(Gallibacteriumanatis,G.anatis)UMN179的外膜蛋白W(Outer membrane protein W,OmpW)基因序列设计一对引物,对鸭源鸡杆菌PDS-RZ-1-SLG株的OmpW基因进行克隆、测序,并通过生物信息学软件对该蛋白结构与功能进行分析及预测.结果显示,OmpW基因大小为705bp,编码234个氨基酸;与鸭源鸡杆菌UMN
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