【摘 要】
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随着农杆菌介导的T-DNA插入突变在真菌遗传转化中普遍应用,反向遗传学已成为研究真菌基因功能的一种重要途径.T-DNA插入突变需要鉴定插入位点,目前鉴定T-DNA插入位点常采用HiTAIL-PCR扩增右臂侧翼基因组DNA序列,也有少数采用质粒挽救,外加接头的PCR扩增的报道.这些技术或因模板处理或因引物不确定性问题而导致扩增效率低,重复性差.也有通过反向PCR扩增未知序列的报道,因没有找到合适的限
【机 构】
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河南省农业科学院园艺研究所,郑州450002 浙江大学农业与生物技术学院,杭州310012
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随着农杆菌介导的T-DNA插入突变在真菌遗传转化中普遍应用,反向遗传学已成为研究真菌基因功能的一种重要途径.T-DNA插入突变需要鉴定插入位点,目前鉴定T-DNA插入位点常采用HiTAIL-PCR扩增右臂侧翼基因组DNA序列,也有少数采用质粒挽救,外加接头的PCR扩增的报道.这些技术或因模板处理或因引物不确定性问题而导致扩增效率低,重复性差.也有通过反向PCR扩增未知序列的报道,因没有找到合适的限制性酶切位点或合适的引物对,导致其PCR扩增效率非常低.因此,需要探索出一种更高效率、更准确、适于T-DNA插入位点鉴定技术,以满足不断增加的T-DNA插入突变研究需求.
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