【摘 要】
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目的 构建携带OPN基因的慢病毒载体,并感染小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),使其OPN梯度表达后检测增殖及迁移功能的变化.方法从小鼠肾脏中提取RNA,基因扩增出小鼠OPN基因,
【出 处】
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2014中华医学会整形外科分会第十三次全国学术交流会
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目的 构建携带OPN基因的慢病毒载体,并感染小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),使其OPN梯度表达后检测增殖及迁移功能的变化.方法从小鼠肾脏中提取RNA,基因扩增出小鼠OPN基因,并将其连接至慢病毒载体上.包装的重组慢病毒(包括携带OPN基因及空载慢病毒),分别感染基因敲除型(OPN-/-)与野生型小鼠的BMSCs；通过CCK8细胞增殖实验、Transwell小室检测感染后小鼠骨髓间充质干细胞增殖及迁移功能的变化.结果成功构建并包装了OPN-pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP及pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP慢病毒,分别感染OPN-/-及野生型BMSCs.Western Blot检测到细胞内OPN蛋白呈梯度表达.经CCK8及Transwell小室方法发现随着OPN表达的增强,细胞增殖及迁移出现改变,结果显示OPN-/-的BMSCs感染OPN慢病毒后OPN蛋白表达量提高,并能增加其体外的迁移及增殖,与OPN-/-细胞差异显著(p＜0.01).
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