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目的：克隆小鼠孤儿核受体(NR4A1)基因全长cDNA的读码框,构建携带NR4A1基因的重组真核表达载体,为研究其在心肌细胞中的功能作准备.方法：从pax-8敲除的小鼠心肌组织提取总RNA,通过逆转录得到总cDNA,利用逆转录PCR法扩增,将目的产物与pGEM-T Easy载体连接,测序分析正确后,再以相同PCR方法扩增,将其与真核表达载体pIERS2-ZsGreen1连接,构建重组质粒.经限制性酶切及测序鉴定后,利用Lipofectamine2000将重组载体pIERS2-ZsGreen1-NR4A1转染到H9C2心肌细胞.RT-PCR法及Western blotting法检测转染后NR4A1mRNA及蛋白的表达.结果:成功构建了小鼠pIERS2-ZsGreen 1-NR4A1真核表达载体，转染重组载体后NR4A1 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空载体组(P<0.05)。结论:通过基因重组技术，成功克隆了NR4A1基因，并构建了真核表达载体pIERS2-ZsGreen 1-NR4A1,且能够在H9C2心肌细胞中获得有效过表达，这为进一步探讨NR4A1基因的生物学功能及机制奠定了基础。