头孢菌素C(CPC)酰化酶(CA)是一种能将CPC直接转化成7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的生物酶,在工业生产中为了实现酶的重复使用,需要采用固定化酶对底物进行催化.在本研究中,利用戊二醛(glut)作交联剂,通过不同的方式将CPC酰化酶固定在LX-HA1000(HA)载体上(方法1：CPC酰化酶与HA载体离子吸附后再用戊二醛进行交联制备得到固定化酶(HA-CPC酰化酶-glut)；方法2：氨基载体首先用戊二醛活化后再与CPC酰化酶进行共价结合得到固定化酶(HA-glut-CPC酰化酶)).结果显示：HA-CA-glut的稳定性优于HA-glut-CA.并进一步对HA-CA-glut的制备过程中的影响因素进行了优化,得到最优条件为：25℃下离子吸附3h,0.5％的戊二醛交联1h,最后再强化交联24h.不论是HA-CA-glut还是HA-glut-CA衍生物,都会有部分醛基的剩余,这些活泼基团的存在可能会引起不必要的反应造成CPC酰化酶结构上的扭曲,致使酶的稳定性降低.因此选择合适的后修饰方式将剩余的醛基进行封闭是非常有必要的.选择在pH8.0环境下能与醛基反应的含有氨基的物质(乙二胺、赖氨酸、壳聚糖、聚乙烯亚胺等)作为后修饰剂,对HA-CA-glut和HA-glut-CA进行封闭.小分子胺类物质对HA-glut-CA的后修饰没有提升固定化酶的稳定性,而长链大分子可以小幅度的提升固定化酶的热稳定性.HA-CA-glut在经过小分子胺类物质和大分子胺类物质的修饰后,固定化酶的热稳定性都有一定提高,尤其是壳聚糖(MW.2000)和聚乙烯亚胺(MW.20000)修饰的固定化酶具有较高的热稳定性,而且其耐酸性也优于其他的固定化酶.这种将CPC酰化酶通过离子作用固定在HA载体之后,再与戊二醛交联,进而用无需活化的氨基大分子进行后修饰的方法具有简单、有效的特点,使其具有在工业生产中推广的潜力.