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本试验在先前研究的基础上开展田间试验,进一步研究猪瘟病毒DNA疫苗构建体pcDSW和pIRE2IL2的免疫效果和生物安全性。首先将未免疫的经ELISA检测为CSF抗体阴性的断奶仔猪66头随机分成6个试验组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组.每组10头)和1个非免疫对照组1组(Ⅶ组,6头)。Ⅰ和Ⅱ组分别为pcDSW和pIRE2IL2质粒免疫组(肌注1 mg/头);Ⅲ和Ⅳ组为Prime-Boost程序免疫组,分别应用pcDSW和pIRE2IL2进行首免(肌注1 mg/头),二和三免用杆状病毒表达CS-FV免疫原E2糖蛋白;Ⅴ和Ⅵ组为沙门氏菌为载体介导的pcDSW和pIRE2IL2(肌注细菌数为1.0 ×1010CFU/头)。每组免疫3次,间隔2周,免疫前和免疫后采血,分离血清,测定抗体水平。最后三免2周后用100X稀释的猪瘟石门株血毒进行攻击,结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组保护率7/8-9/10(约90%),Ⅴ组保护率6/10,Ⅵ组保护率0/10,Ⅶ组除1头耐过成为僵猪外,全部死亡。应用IDEXX CSFV抗体检测ELISA试剂盒测定结果表明3免后Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组抗体阳转率分别为10/10、7/10、10/10、7/10和8/10。Ⅵ组无明显抗体阳转率。统计分析表明,以pcDSW为主的Ⅰ和Ⅲ组免疫后抗体水平升高极显著(P<0.01=,抗体滴度明显高于其他组。从pIRE2IL2免疫猪舍以及非免疫对照组猪舍采集环境粪土样品,提取细菌DNA,扩增3种DNA疫苗基因序列(Ampr基因,CMV启动子和CSFVE2基因)。结果8/9(88.9%)的免疫前环境样品和6/9(66.7%)的一免、二免后环境样品均扩增出Ampr。所有样品均未扩增出E2和CMV基因。为了验证扩增的Ampr是否来自DNA疫苗质粒,对所有免疫前后扩增的Ampr进行了序列分析。结果环境样品中Ampr与DNA疫苗质粒Ampr的核苷酸同源性为95.5%-99.3%。此外,从非试验地区生猪交易市场采集的环境样品中扩出的Ampr与DNA疫苗质粒Ampr的核苷酸同源性为93.0%-99.4%。说明检出的Ampr是自然界存在的抗性细菌本底,而非DNA疫苗水平转移的缘故。证明本试验所用DNA疫苗对环境是安全的。