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胆汁酸为胆汁的主要成分,是一组结构类似的类固醇酸的总称。在人的胆汁中,胆汁酸有游离型胆汁酸和结合型胆汁酸两大类。胆汁酸能够在肠道促进脂类消化吸收,同时还可以抑制胆汁中胆固醇结晶析出。胆汁酸主要在肝脏由胆固醇转化而来,具有广泛的生物学作用[1]。近年来研究发现胆汁酸对调节糖、脂代谢以及能量代谢具有重要作用[2]。因此胆汁酸成分及含量的检测对于靶向代谢组学研究,了解疾病状态等都有重要意义[3,4]。现有的报道不仅检测胆汁酸种类比较少,而且大部分是采用串联三重四极杆低分辨质谱,采用MRM检测模式定量胆汁酸[5,6]。三重四极杆质谱定量化合物重复性好,定量限低,但是因为是低分辨质谱,分辨率不够理想。而胆汁酸结构比较稳定,不容易碎裂出特征碎片,多种胆汁酸检测时采用的MRM离子对母离子与子离子相同,再加上胆汁酸同分异构体特别多。这就导致胆汁酸检测时基线非常高,干扰非常大,定性定量结果都受到严重影响。基于以上原因,建立了采用液相色谱串联高分辨质谱(QExactive)定性定量20种胆汁酸的方法。使用甲醇与水(0.1%FA,5mmol/l乙酸胺)作为流动相,使用waters的HSS T3 100*2.1 1.7um色谱柱,柱温40℃,流速0.3ml/min,采用梯度洗脱,0min,30%A;5min,60%A;10min,85%A;15min,100%A。质谱采用负谱扫描,SprayVoltage:-3000,Capillary Temperature:320,Sheath Gas:30,Aux Gas:10。检测结果见下图1。我们建立的分析方法分析的胆汁酸种类不仅多,而且不同种类胆汁酸,尤其几种同分异构体几乎都能液相完全分离。Q Exactive质谱因其本身的高分辨优势,母离子扫描就可以精确定量,有效避免了低分辨质谱的基线干扰问题。对于低丰度的胆汁酸,我们还开发了固相萃取之后,浓缩挥干再复溶的前处理方法,保证血中胆汁酸的检出限符合临床检测要求.