【摘 要】
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本文以Pseudoalteromonas carrageenoora AS5菌株中的car基因序列为研究对象,通过PCR克隆卡拉胶酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a,以期获得稳定性较高的酶,并实现大量制
【机 构】
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集美大学食品与生物工程学院 福建厦门361021
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本文以Pseudoalteromonas carrageenoora AS5菌株中的car基因序列为研究对象,通过PCR克隆卡拉胶酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a,以期获得稳定性较高的酶,并实现大量制备卡拉胶酶的目的.利用生物信息学方法分析该基因及其推测出的编码蛋白理化性质、蛋白的亲水性或疏水性、预测信号肽、跨膜结构域、蛋白二级结构、三级结构等特征.结果表明,ASY5菌株的的car基因开放阅读框全长1194 bp,卡拉胶蛋白包含397个氨基酸,分子量为35.8 kD、理论等电点为6.17,结构域分析表明该κ-卡拉酶符合GH16家族的特点,是一种含有信号肽的可溶性亲水蛋白质.二级结构以α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲为其基本结构单元.利用SWISS-MODEL对Pseudoalteromonas carrageenovoraκ-卡拉胶酶序列进行三维模建,Pymol软件观察Pseudoalteromonas carrageenovoraκ-卡拉胶酶与模版的重叠情况较好.
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