【摘 要】
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为建立鸡程序性死亡分子1(PD-1)和及其配体(PD-Ll)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法，根据GenBank中PD-1,PD-L1的基因序列，以鸡肌动蛋白(p-actin)基因为内参，设计特异性引物扩增目的基因片段。将三种目的基因克隆至pMD18-T载体上，经测序鉴定，得到各自阳性克隆质粒，以三种阳性克隆质粒为标准品，进行1:10倍比稀释，以建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
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为建立鸡程序性死亡分子1(PD-1)和及其配体(PD-Ll)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法，根据GenBank中PD-1,PD-L1的基因序列，以鸡肌动蛋白(p-actin)基因为内参，设计特异性引物扩增目的基因片段。将三种目的基因克隆至pMD18-T载体上，经测序鉴定，得到各自阳性克隆质粒，以三种阳性克隆质粒为标准品，进行1:10倍比稀释，以建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及敏感性、特异性、重复性试验。结果表明，当标准品稀释度为1×102～1×1010copies/μL时，三种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系，相关系数R2均大于0.990,敏感性较好。熔解曲线分析表明，产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对10只4周龄SPF雏鸡外周血单核细胞PD-1和PD-L1 mRNA的相对表达量进行检测，结果表明，虽然鸡PBMC中PD-1 mRNA的平均表达量约为152copies/μL,PD-L1 mRNA的平均表达量约为187copies/μL, 2种目的基因都呈低水平表达，但其表达水平在本方法检测范围内，且重复性良好。本研究成功建立了敏感性高、特异性强、重复性好的鸡PD-1和PD-Ll SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法，研究结果为鸡PD-1和PD-Ll的定量分析提供了技术平台。
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