【摘 要】
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目的 在前期已经成功构建整合素链接激酶(Integrin-Linked Kinase,ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,本实验进一步探讨ILK基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因蛋白激酶B(protein kinase B,Akt/PKB)、糖原合成酶激酶3(glycogen synthesis kinase,GSK-3β)、转录因子AP-1(activator protein 1)
【机 构】
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上海中医药大学龙华医院肿瘤科 200032
【出 处】
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2013中国医师协会中西医结合医师大会
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目的 在前期已经成功构建整合素链接激酶(Integrin-Linked Kinase,ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,本实验进一步探讨ILK基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因蛋白激酶B(protein kinase B,Akt/PKB)、糖原合成酶激酶3(glycogen synthesis kinase,GSK-3β)、转录因子AP-1(activator protein 1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP9)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)表达的影响.方法构建转染ILK基因RNAi慢病毒表达载体的细胞模型,分为RNAi靶点病毒感染细胞组(Knock Down组)与对照组(Negative Control组),采用不同浓度的肺岩宁含药血清干预治疗,应用Realtime-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因AKT(PKB)、 GSK-3β、 AP-1、 cyclin D1、MMP-9、VEGF、β-catenin的mRNA及蛋白表达水平.结果 KD组与NC组相比,AKT(PKB)、 GSK-3β、 VEGF的mRNA表达水平显著降低,且差异均有统计学意义(P＜0.05)；AKT(PKB)、GSK-3β、 VEGF的蛋白表达水平也明显降低,与Realtime-PCR结果一致.KD+10％中药含药血清与NC+10％中药合药血清组相比,AKT(PKB)、GSK-3β、VEGF、 AP-1、β-catenin的mRNA表达水平显著降低,且差异均有统计学意义(P＜0.05)；其中AKT(PKB)、VEGF、β-catenin的蛋白表达水平明显降低,与Realtime-PCR结果一致.KD+20％中药含药血清与NC+20％中药含药血清组相比,GSK-3β、VEGF、β-catenin的mRNA表达水平显著降低,且差异均有统计学意义(P＜0.05)；其中β-catenin的蛋白表达水平明显降低,与Realtime-PCR结果一致.结论 沉默ILK基因后可以明显降低AKT(PKB)、GSK-3β、VEGF的表达,从而起到抑制肿瘤细胞侵袭转移的作用；中药肺岩宁方在一定程度上可以下调AKT(PKB)、 VEGF、β-catenin基因的表达有可能起到抗肿瘤转移的作用.
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