【摘 要】
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对新近测定的S. suis2 05ZYtH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,自行设计合成引物,PCR法扩增出约1.3kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分了量约
【机 构】
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南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所 南京 210002
【出 处】
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第九届全军流行病学、第八届全军防生物危害医学专业学术会议
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对新近测定的S. suis2 05ZYtH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,自行设计合成引物,PCR法扩增出约1.3kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分了量约为75KD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在猪链球菌2型05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。
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利用BHK-21细胞对采集自2006年山西运城乙脑疫区内的150份猪脑病料进行了病毒分离,结果从其中一份标本中分离到1株病毒,经血清学、分子生物学以及小鼠感染实验证实其为日本乙型脑炎病毒。采用RT-PCR、5-RACE和3-RACE扩增出乙脑病毒基因全序,结果表明分离乙脑病毒的基因组全序长为10964bp,最大读码框架从96到10394,编码一条3432个氨基酸的前体聚合蛋白。
SARS病毒是已知RNA病毒中基因组最大的一类病毒,目前对其结构功能与致病机理等了解尚少,反向遗传学及体外突变技术为深入开展该领域研究提供了技术手段。刺突蛋白参与SARS病毒与细胞受体结合及膜融合入侵过程,决定着病毒的感染特性,与其致病机制具有密切关系。本研究首先构建SARS病毒BJ01株全长cDNA克隆,在生物信息学分析的基础上对刺突蛋白受体结合区的感染性相关位点及七肽重复区进行突变体构建,比较
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