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目的:了解肾移植术后稳定期受者、感染期受者外周血中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18髓过氧化物酶(MPO)的变化和意义。
方法:1 临床资料 全部肾移植受者均为我院肾移植科门诊和住院病人共30例,均为首次移植。受者给与常规免疫抑制剂治疗(激素+环抱素或普乐可复+骁悉或他克莫司)。根据是否发生感染分为感染组和稳定组。感染组:10例,男7例,女3例,平均年龄32岁。稳定组:20例,男13例,女7例,平均年龄35岁。正常对照组:15例,为我院健康体检者,男10例,女5例,平均年龄28岁。
2 外周血的中性粒细胞的分离,应用RT-PCR(逆转录一聚合酶链反应)的方法检肾移植术后感染和稳定患者外周血中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18 mRNA基因的表达水平,应用分光光度比色法检测外周血中性粒细胞MPO的变化并与健康人群进行比较。
3 半定量RT-PCR检测CD11 b和CD18基因mRNA表达,UVP凝胶图像分析仪分析扫描各条带,以β-actin基因作为内参照,测定各组目的基因相对表达量。
4 分光光度计比色法测髓过样化物酶水平按试剂盒说明书的方法制备标本,加入样品和各种试剂,混匀,37℃恒温水浴箱30min,加入显色剂37℃水浴15min,用分光光度计(460nm蒸馏水调零)比色测定吸光度。按照公式计算MPO活力。
5 统计学分析所有数据采用SPSS17. 0数据包进行分析,数值用均数±标准差( )表示。试验结果,经方差齐性检验后,各组间用单因素方差分析((F检验)或者Kruskal-Wallis检验,检验水准α=0.05。
结果:①肾移植术后感染组患者外周血中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18表达明显低于正常对照组,有统计学意义(P<0. 05或P<0. O1)②肾移植术后感染组患者外周血中性粒细胞MPO表达明显低于正常对照组,有统计学意义((P<0. 05或P < 0. O1)结论肾移植术后稳定期和感染期患者外周血中性粒细胞功能处于抑制状态,表达戮附分子CD11b,CD18和MPO都减少。
结论:正常情况下,CD11b /CD18除少量分布于细胞膜的表面外,大部分储存在细胞内的的储存池。PMN上CD11b/CD18及其配体内皮细胞上ICAM-1很少表达,PMN很少与内皮细胞翻附,即使偶尔黏附也很快分开,不会影响功能。肾移植术后病人外周血中性粒细胞的粘附分子CD11b / CD18表达量减少,术后发生感染的患者减少更明显。提示,与受者术后大量使用免疫抑制剂有关,使中性粒细胞的功能受到了抑制。术后肺部感染患者外周血清中MPO表达水平低于术后稳定患者,而这两组均低于正常对照组。可能与杀菌物质MPO-H2O2-Cr途径的免疫调节作用有关。术后中性粒细胞功能受到全面抑制可能与术后使用大剂量免疫抑制剂有关但其具体机制有待于进一步研究。
方法:1 临床资料 全部肾移植受者均为我院肾移植科门诊和住院病人共30例,均为首次移植。受者给与常规免疫抑制剂治疗(激素+环抱素或普乐可复+骁悉或他克莫司)。根据是否发生感染分为感染组和稳定组。感染组:10例,男7例,女3例,平均年龄32岁。稳定组:20例,男13例,女7例,平均年龄35岁。正常对照组:15例,为我院健康体检者,男10例,女5例,平均年龄28岁。
2 外周血的中性粒细胞的分离,应用RT-PCR(逆转录一聚合酶链反应)的方法检肾移植术后感染和稳定患者外周血中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18 mRNA基因的表达水平,应用分光光度比色法检测外周血中性粒细胞MPO的变化并与健康人群进行比较。
3 半定量RT-PCR检测CD11 b和CD18基因mRNA表达,UVP凝胶图像分析仪分析扫描各条带,以β-actin基因作为内参照,测定各组目的基因相对表达量。
4 分光光度计比色法测髓过样化物酶水平按试剂盒说明书的方法制备标本,加入样品和各种试剂,混匀,37℃恒温水浴箱30min,加入显色剂37℃水浴15min,用分光光度计(460nm蒸馏水调零)比色测定吸光度。按照公式计算MPO活力。
5 统计学分析所有数据采用SPSS17. 0数据包进行分析,数值用均数±标准差( )表示。试验结果,经方差齐性检验后,各组间用单因素方差分析((F检验)或者Kruskal-Wallis检验,检验水准α=0.05。
结果:①肾移植术后感染组患者外周血中性粒细胞粘附分子CD11b和CD18表达明显低于正常对照组,有统计学意义(P<0. 05或P<0. O1)②肾移植术后感染组患者外周血中性粒细胞MPO表达明显低于正常对照组,有统计学意义((P<0. 05或P < 0. O1)结论肾移植术后稳定期和感染期患者外周血中性粒细胞功能处于抑制状态,表达戮附分子CD11b,CD18和MPO都减少。
结论:正常情况下,CD11b /CD18除少量分布于细胞膜的表面外,大部分储存在细胞内的的储存池。PMN上CD11b/CD18及其配体内皮细胞上ICAM-1很少表达,PMN很少与内皮细胞翻附,即使偶尔黏附也很快分开,不会影响功能。肾移植术后病人外周血中性粒细胞的粘附分子CD11b / CD18表达量减少,术后发生感染的患者减少更明显。提示,与受者术后大量使用免疫抑制剂有关,使中性粒细胞的功能受到了抑制。术后肺部感染患者外周血清中MPO表达水平低于术后稳定患者,而这两组均低于正常对照组。可能与杀菌物质MPO-H2O2-Cr途径的免疫调节作用有关。术后中性粒细胞功能受到全面抑制可能与术后使用大剂量免疫抑制剂有关但其具体机制有待于进一步研究。