【摘 要】
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根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计一对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因片段,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经BamHI、XnolI双酶切,回收ORF2基因,,定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.用此表达产物包被酶标板,
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所·农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室,江苏,南京,210014;南京农业大学,江苏,南京,210095
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计一对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因片段,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经BamHI、XnolI双酶切,回收ORF2基因,,定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.用此表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床340份送检血清进行了检测,结果表明其阳性率为％.
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为特征的、严重危害养猪业的主要传染性疾病之一,给世界范围的养猪业造成巨大经济损失.PRRS病毒(PRRSV)对宿主淋巴细胞有严格嗜性,其RNA基因组易变异,常规的疫苗设计策略难以产生理想的免疫效果,因此,探索防治该病的新方法有重要意义.RNA干扰(
为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h,
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