【摘 要】
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目的 分离优化培养树鼩原代肾细胞,并探索EV71对树鼩肾细胞的感染性。方法 胰蛋白酶-EDTA消化法分离得到的树鼩原代肾细胞,分别用10%FBS DMEM、5ng/mL10%FBS DMEM、10%FBS RPMI1640以及5ng/mL 10%FBS RPMI1640四种培养基同时进行培养比较,显微镜下观察细胞生长状态,EV71感染最佳状态细胞,一步法RT-PCR和实时定量PCR检测感染结果。结
【机 构】
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昆明理工大学生命科学与技术学院,云南省分子医学研究中心,昆明650500,云南
【出 处】
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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会
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目的 分离优化培养树鼩原代肾细胞,并探索EV71对树鼩肾细胞的感染性。方法 胰蛋白酶-EDTA消化法分离得到的树鼩原代肾细胞,分别用10%FBS DMEM、5ng/mL10%FBS DMEM、10%FBS RPMI1640以及5ng/mL 10%FBS RPMI1640四种培养基同时进行培养比较,显微镜下观察细胞生长状态,EV71感染最佳状态细胞,一步法RT-PCR和实时定量PCR检测感染结果。结果 5ng/mL EGF 10%FBS RPMI1640培养的树鼩原代肾细胞,生长速度快,生长状态好,EV71感染树鼩原代肾细胞后在第48h收获的病毒上清,RT-PCR可检测出目的条带,实时定量PCR可检测出比洗涤液高的病毒载量。结论 含5ng/mL EGF的RPM11640完全培养基最适合培养树鼩原代肾细胞,EV71可在分离培养出来的树鼩肾细胞中增殖,在分子水平上验证了EV71对树鼩原代肾细胞具有感染性,这为EV71感染树鼩模型的建立提供理论依据。
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