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玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)是导致玉米大斑病发生的丝状病原真菌,该病菌能够代谢产生DHN黑色素,且黑色素与病菌的致病力密切相关.DHN黑色素合成途径包括5个关键酶基因,其中的氧化酶基因为漆酶.漆酶(Lacease)也称为多铜氧化酶,与色素合成、木质素降解、微生物菌体形态建成、子实体形成、病原菌致病性和脱毒作用等密切相关.文献报道,漆酶与板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)致病力的强弱、根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的抗逆性和致病性、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)的致病过程有关;烟曲霉(Aspergillus funigatus)漆酶基因缺失突变菌株颜色变浅、漆酶活性降低.因此,漆酶作为DHN黑色素合成酶是许多真菌致病的相关因子,漆酶的缺失使附着胞黑色素合成受阻从而严重影响真菌的致病力.本实验室前期研究结果表明,玉米大斑病菌能够代谢产生漆酶,并且在致病过程中,漆酶可以促进病原菌在寄主组织中的扩展.本研究在克隆获得玉米大斑病菌漆酶基因StLAC2的基础上,利用同源重组方法创制了StLAC2基因的敲除突变体;通过对突变体进行分析,初步确定StLAC2基因在玉米大斑病菌漆酶活性、黑色素合成、附着胞穿透力和分生孢子形成等方面具有重要作用.为进一步验证该基因功能,以质粒pBARKS1为骨架,成功构建了StLAC2基因的回复载体,拟创制该基因的回复突变体,最终明确StLAC2基因在玉米大斑病菌生长、代谢、致病等方面的作用.