【摘 要】
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目的：研究甲氨蝶呤(MTX)诱导的细胞DNA双链断裂损伤及同源重组修复通路是否参与介导人绒癌细胞的化疗敏感性.方法：MTT法检测细胞对MTX的敏感性,中性彗星实验研究MTX是否能诱导肿瘤细胞DNA双链断裂损伤,Western Blot通过检测yH2AX的表达研究损伤的浓度和时间依赖效应,RT-PCR和Western Blot分别检测细胞中同源重组修复相关基因和蛋白及p53的表达.结果：JAR、JE
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科
【出 处】
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2015中国医师协会妇产科医师大会
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目的：研究甲氨蝶呤(MTX)诱导的细胞DNA双链断裂损伤及同源重组修复通路是否参与介导人绒癌细胞的化疗敏感性.方法：MTT法检测细胞对MTX的敏感性,中性彗星实验研究MTX是否能诱导肿瘤细胞DNA双链断裂损伤,Western Blot通过检测yH2AX的表达研究损伤的浓度和时间依赖效应,RT-PCR和Western Blot分别检测细胞中同源重组修复相关基因和蛋白及p53的表达.结果：JAR、JEG-3、MG63细胞对MTX48h的半数抑制浓度(IC50)分别为28.39±3.02 μM,23.70±2.58μM,30.92±3.51 μM；MTX处理48h后JAR、JEG-3和MG63细胞平均尾长分别为88.50±2.31 μm,121.71±5.21 μm,47.54±2.52 μ m；在JAR、JEG-3细胞中yH2AX蛋白的表达水平随着MTX处理浓度和时间的增加显著升高,而在MG63细胞中,y H2AX蛋白的表达水平先升高后降低；RT-PCR检测JAR、JEG-3细胞中,RAD51 mRNA的表达被显著抑制.MG63细胞中,RAD51 mRNA的表达水平轻度降低.Western Blot进一步检测到在JAR和JEG-3细胞中RAD51蛋白的表达抑制具有浓度和时间依赖性,MG63细胞中,随着药物作用浓度的升高,RAD51表达略微降低,但随着时间的延长,抑制效应会解除.同时p53蛋白的表达与RAD51蛋白的表达水平呈显著的负相关.结论：MTX诱导人绒癌细胞持续性DNA双链断裂损伤,同时其同源重组修复蛋白RAD51的表达易被抑制,这种易损伤及低修复的特性可能介导其化疗高敏性.
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