【摘 要】
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本研究通过PCR分别扩增α-β2,ε毒素基因,以pProHTa作为表达载体,构建了重组表达质粒pProHTa-α-β2-ε,并转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达α-β2-ε毒素蛋白.SDS-PAGE分析显
【机 构】
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东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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本研究通过PCR分别扩增α-β2,ε毒素基因,以pProHTa作为表达载体,构建了重组表达质粒pProHTa-α-β2-ε,并转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达α-β2-ε毒素蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的毒素蛋白大小约92.4 ku,主要以包涵体形式存在.免疫6～8周龄BALB/c小鼠,分别用A型和B型产气荚膜梭菌强毒株对免疫鼠进行攻毒,测定免疫鼠血清中抗体的中和活性,结果表明,免疫鼠对A型产气荚膜梭菌强毒株1 LD100和2LD1m的攻毒保护率分别为100％和60％,对B型产气荚膜梭菌强毒株1 LD100和2 LD100的攻毒保护率分别为100％和80％.免疫鼠血清可体外中和A、B型产气荚膜梭菌强毒株产生的毒素.血清稀释为1∶20时(血清效价为218),对1 LD100A型和B型产气荚膜梭菌毒素的中和效率均可达到100％.以上结果表明,本研究构建的重组大肠杆菌表达的α-β2-ε融合蛋白具有良好的免疫原性,能有效刺激机体产生中和抗体,可作为基因工程疫苗的有效组分,为产气荚膜梭菌多价候选亚单位疫苗的研究奠定了基础.
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