【摘 要】
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目的建立抗CD20单克隆抗体的ADCC生物学活性检测方法。方法利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRⅢα细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTMLucife
【机 构】
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中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室;
【基金项目】
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国家“重大新药创制”科技重大专项(编号2014ZX09304311-001;2012ZX09304010)
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目的建立抗CD20单克隆抗体的ADCC生物学活性检测方法。方法利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRⅢα细胞系作为效应细胞,WIL2-S细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTMLuciferase Assay system)进行抗CD20单抗的ADCC生物学活性检测,并对试验条件进行优化及方法学验证。结果抗CD20单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=（A-D）/[1+（X/C）B]+D。方法经优化确定靶细胞为WIL2-S细胞,抗体稀释浓度为18000ng/ml,1:5倍的稀释倍数,效靶比为6:1,诱导时间为6h。该方法具有良好的专属性,8次独立试验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为44.39±3.93、72.74±2.78、128.28±7.01以及168.19±2.70,变异系数均小于10%,回收率分别为88.78±7.85、96.99±3.70、102.63±5.61以及112.12±1.80。结论首次成功建立抗CD20单抗ADCC生物学活性的转基因细胞检测方法 ,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗CD20单抗ADCC生物学活性的常规检测方法 。
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