【摘 要】
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目的：摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NSI抗原的方法，得到高纯度的重组蛋白。方法：将重组质粒pET32a-NS1转染大肠杆菌BL21(DE3)中表达，表达产物分别以尿素变性、复性，Ni-NTA His.Bind Resin亲和以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)洗涤溶解等3种纯化方法分别从包涵体中分离纯化NS1蛋白，并进行比较研究。结果：通过原核表达得到分子量约45ku的
【机 构】
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河北省兽药监察所,石家庄 050000 北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,海淀 100097
【出 处】
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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会
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目的：摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NSI抗原的方法，得到高纯度的重组蛋白。
方法：将重组质粒pET32a-NS1转染大肠杆菌BL21(DE3)中表达，表达产物分别以尿素变性、复性，Ni-NTA His.Bind Resin亲和以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)洗涤溶解等3种纯化方法分别从包涵体中分离纯化NS1蛋白，并进行比较研究。
结果：通过原核表达得到分子量约45ku的目的蛋白，三种方法均能分离和纯化出NS1重组蛋白，其中尿素纯化的蛋白纯度为50-60 ％：Ni-NTA His.Bind Resin亲和纯化的蛋白纯度为80-90 ％；脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)纯化的NSl蛋白的纯度达95％以上，western-blot检测表明复性后的纯化蛋白具有良好的生物学活性。
结论：应用十二烷基肌氨酸钠洗涤纯化是最佳的纯化NS1蛋白的方法，所获得的蛋白可作为包被ELISA的抗原。
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