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目的:比较不同培养方法和不同处理方法对转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)的细胞毒活性的影响,并测定转hTNF-a基因蓝藻IB02(+)的抗肿瘤药效。
方法:采用结晶紫染色法检测不同浓度的转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)对L929细胞的体外细胞毒活性。用对小鼠肝癌移植性肿瘤H-22的抑制率来测定体内抗肿瘤药效。
结果:细胞毒活性实验表明:在培养基中添加有机碳能提高转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)对L929细胞的细胞毒活性;与超声破碎法相比,采用反复冻融法处理同样可以提高样品的细胞毒活性。体外实验表明转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)的细胞毒活性,约为8000U/mg。小鼠一次口服最大耐受量(MTD)为16.0g/kg,在观察期内所有受试小鼠无一死亡,生长发育正常,主要脏器未见异常,未显示明显毒性。药效学研究表明:口服6g/kg转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)对小鼠肝癌移植性肿瘤H-22的抑制率平均值37.7±3.4%,最高值为41.5%(P<0.001)。
结论:使用含有有机碳的培养基培养转hTNF-α基因蓝藻IB02(+),使用反复冻融法对样品进行处理均可以提高样品的细胞毒活性。转hTNF-α基因蓝藻IB02(+)抗肿瘤作用明显,本品无明显的毒性。