【摘 要】
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目的 本论文通过不同浓度5-氟尿嘧啶作用秀丽隐杆线虫,观察秀丽隐杆线虫的繁殖能力的变化及其相关基因的表达变化,探讨5-氟尿嘧啶影响秀丽隐杆线虫生殖的原理以及5-氟尿
【机 构】
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兰州大学基础医学院病原生物学研究所,甘肃兰州市,730000
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目的 本论文通过不同浓度5-氟尿嘧啶作用秀丽隐杆线虫,观察秀丽隐杆线虫的繁殖能力的变化及其相关基因的表达变化,探讨5-氟尿嘧啶影响秀丽隐杆线虫生殖的原理以及5-氟尿嘧啶的作用机理.方法 将不同浓度5-氟尿嘧啶处理秀丽隐杆线虫,分别为在体视显微镜下观察线虫的产卵情况以及活动状态;提取各组线虫的总RNA,进行数字基因表达谱的测序,比较差异表达基因以及相关涉及的调控通路;并用实时荧光定量PCR进行结果验证.结果 在5uM,10uM,20uM的5-氟尿嘧啶处理的线虫中,线虫的产卵量都有不同程度的减少.5uM和10uM组与正常组相比产卵量均有减少(P<0.05),但是20uM组减少更显著(P<0.05).数字基因表达库的序列与参考数据库的比对,发现5-氟尿嘧啶20uM组有1147个基因上调,1067个基因下调.通过KEGG数据库的分析和比对,有19个基因有差异性表达明显(P<0.05 和FDR<0.05);通过P<0.05和Q<0.05筛选出具有统计学意义的28条通路,且有4条通路与5-氟尿嘧啶处理后的基因变化相关.其中16个基因属于Focal adhesion信号通路和ECM-receptor interaction通路;各1个基因参与到TGF-beta signaling和Hypertrophic cardiomyopathy通路.实时定量RT-PCR对筛选的19个基因进行验证,结果显示与数字基因表达谱筛选的结果趋势一致.结论 在本文的研究中发现使用不同浓度5-氟尿嘧啶作用后,线虫产卵率明显降低.数字基因表达谱结果提示5-氟尿嘧啶20uM组线虫与对照组相比有1147个基因有表达差异性,并筛选得出19个基因表达变化明显.其中有14个基因共同参与ECM-receptor interaction通路和Focal adhesion通路,这些基因均属于胶原蛋白家族基因,它们可能与线虫生殖细胞的发育和生殖系统的形成有关.daf-14属于TGF-beta信号通路,主要调节SMAD2和SMAD3,可能与生殖细胞分化有关.CELE_C24B9.3属于Hypertrophic cardiomyopathy信号通路,机理并不清.
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