[目的]运用噬菌体展示技术构建驼源抗磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)特异性单域抗体的抗体库并进行初步鉴定。[方法]以磺胺间二甲氧嘧啶-牛血清白蛋白(SDM-BSA)为免疫原对双峰驼进行免疫,酶联免疫吸附实验(ELISA)监测抗血清效价,从免疫骆驼外周血分离出具有免疫应答信息的淋巴细胞,提取总RNA后经逆转录制备cDNA,以cDNA为模板,进行两轮巢式PCR,获得目的基因片段,将其克隆至噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库。以磺胺间二甲氧嘧啶-卵清白蛋白(SDM-OVA)作为抗原进行亲和筛选,经过4轮筛选,富集特异性结合SDM噬菌体抗体。ELISA鉴定每一轮筛选后的总噬菌体,Phage ELISA筛选阳性克隆,进行DNA测序,然后将抗体序列与NCBI数据库中抗体序列进行比对分析,确定其骨架区和可变区。以阳性克隆作为模板,扩增目的基因片段,克隆到表达载体pET-28a上,构建表达载体。重组载体转化BL21 (DE3)表达菌并通过优化实现单域抗体的大量表达。SDS-PAGE鉴定抗体表达结果,然后再用ELISA鉴定与SDM的结合活性。[结果]构建了库容为1.08×10~8的抗SDM的噬菌体抗体库,基因插入率为97.14%(34/35),用SDM-OVA作为抗原筛选抗体,获得了4株与SDM特异性结合的阳性克隆,分别是V1、V3、V6、V8。阳性克隆进行DNA测序后在NCBI数据库中进行分析比对,结果显示4株克隆序列各不相同。4株阳性克隆载体构建成功,并在BL21细胞表达。表达的细胞上清经ELISA鉴定,4个抗体均得到表达,V3、V8具有较好的结合活性。SDS-PAGE鉴定,抗体在上清中大量表达。[结论]成功构建了抗SDM噬菌体抗体库,筛选到4株与SDM特异性结合的抗体。抗体序列通过BL21细胞进行全抗体表达,抗体表达量高,抗体活性需要进一步验证。本研究对抗SDM单域抗体噬菌体库的建立和筛选进行了各方面的探索,为后续磺胺类药物残留检测试剂盒的研发提供参考和借鉴。