【摘 要】
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本试验将15头PRRSV和PCV2血清抗原和抗体均为阴性的35日龄仔猪PAMs 进行体外培养,并随机分为4组:对照组、PRSSV组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)和MyD88干扰-PRRSV组(干扰-PRRSV 组),体外培养0、6、12、24、36h 后收获细胞及培养上清液.激光共聚焦显微镜观察PRRSV 的感染情况;小干扰RNA法(siRNA)沉默PAMs 中MyD88基因;荧
【机 构】
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南京农业大学动物医学院,南京 210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
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本试验将15头PRRSV和PCV2血清抗原和抗体均为阴性的35日龄仔猪PAMs 进行体外培养,并随机分为4组:对照组、PRSSV组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)和MyD88干扰-PRRSV组(干扰-PRRSV 组),体外培养0、6、12、24、36h 后收获细胞及培养上清液.激光共聚焦显微镜观察PRRSV 的感染情况;小干扰RNA法(siRNA)沉默PAMs 中MyD88基因;荧光定量RT-PCR法检测PAMs中Toll样受体(TLRs)基因转录的变化;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-10的含量变化;Western blot方法测定PAMs胞浆中MyD88、NF-κB、磷酸化抑制性кB(p-IкB)以及胞核中NF-κB蛋白含量变化;电泳迁移率法(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合率. 结果显示,PRRSV对PAMs的感染率随时间而增加,感染36h时达98％左右.PRRSV能影响PAMs中TLRs的mRNA表达水平,升高PAMs培养上清液中IL-10含量;PRRSV感染后PAMs 胞浆内MyD88、p-IκB及胞核中NF-κB的蛋白含量均高于对照组.siRNA使MyD88基因沉默达85％,干扰-PRRSV组PAMs培养上清液中IL-10蛋白含量显著低于同时间点PRRSV组,干扰-PRRSV组PAMs胞浆内MyD88、p-IκBα及胞核中NF-κB含量和NF-κB与DNA的结合率均显著低于PRRSV组.上述结果说明,PRRSV能通过TLRs-MyD88-NF-κB信号途径上调PAMsIL-10表达水平.
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