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目的:研究(99m)Tc标记的针对增殖细胞核抗原(proliferating cell nucleus antigene,PCNA)mRNA的寡核苷酸在血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)中的摄取动力学,探讨反义探针是否具有应用于粥样硬化斑块的早期无创伤性诊断的基础。
方法:以NHS-MAC_3为螯合剂,用(99m)Tc针对PCNA的反义寡核苷酸进行标记(antisense oligonucleotide,ASON);以sephadex G-25柱层析检测标记率;以Sep-Pak C_(18)小柱观察放射化学纯度、标记物体外稳定性和标记的ASON与互补链的结合能力;研究标记的正义寡核苷酸(senseoligonucleotide,SON)、ASON在对数生长期和平台期血管平滑肌细胞中的摄取动力学。
结果:NHS-MAG_3-ASON的标记率为(60.10±3.01)%(n=5),比放射性活度为1960 kBq/μg,经纯化后放射化学纯度可达95%以上;标记物在体外能稳定存在,且仍保持与互补链的结合能力;对数生长期细胞对ASON的摄取明显高于SON[峰值分别为(15.2±0.58)%和(5.6±0.42)%,P<0.05],对数生长期细胞对ASON的摄取比平台期细胞高(P<0.05);240 min时ASON在对数生长期细胞内较SON明显滞留(P<0.05);对数生长细胞对ASON的清除较平台期细胞明显缓慢(P<0.05)。
结论:99mTc标记针对PCNA的ASON能被增殖旺盛的血管平滑肌细胞选择性摄取,具有进一步应用于粥样硬化斑块的整体动物模型显像的基础。